Matériel et Méthodes
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Cette filtration est poursuivie jusqu’à la décoloration du résidu soit V1 ce volume.
5.1.2. Lavage :
Le mélange est transvasé dans une ampoule à décanter avec l’ajout de 25 ml d’Hexane et 20
ml d’eau distillée.
Après la décantation on procède à une légère agitation de 30 à 60 secondes. Il résulte alors la
séparation de 2 phases : phase organique et phase aqueuse.
La phase aqueuse est reéxtraite 2 à 3 fois par 40 ml de solvant Ethanol-Hexane (1 :1), à
chaque fois la phase organique obtenue est rajoutée à la première phase organique.
L’ensemble des phases organiques est lavé avec de l’Hexane 2 à 3 fois et filtré, en présence
de Na2 So4 qui est additionné au filtrat pour éliminer l’humidité.
La solution obtenue est évaporée dans un rota-vapor à 40°C pour la récupération de l’Hexane.
5.1.3. Saponification :
Après l’évaporation du solvant, nous procédons à la saponification qui consiste à l’ajout d’un
volume égale de KOH méthanoïque 10%.
Le mélange est chauffée pendant 10 min sur une plaque chauffante à 40°C puis refroidi
rapidement avec de la glace.
Après la saponification, on passe au lavage avec l’Hexane, et à la fin on ajuste le volume a 25
ml avec de l’Hexane.
Le concentré de chaque échantillon est mis dans un spectrophotomètre pour déterminer leurs
absorbance est donc déterminer leurs teneurs en caroténoïdes.
6-Dosage par spectrophotométrie des caroténoïdes ; représenté par le β-carotène
(protocole de 4eme année alimentation nutrition, 2014) :
6.1. Mode opératoire :
6.1.1. Préparation de la gamme étalon :
La gamme étalon est celle adoptée par BENK (1960).
-La solution de bichromate de potassium standard est préparée par dissolution de 0.036g dans
100 ml ; chaque ml de la solution correspond à 0.0266mg de caroténoïdes totaux calculés
comme β-carotène.
- On a donc une solution d’une concentration de 26.6 mg/l de caroténoïdes, à partir de
laquelle on prépare nos différents standards aux différentes concentrations (mg/L) :
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Cette filtration est poursuivie jusqu’à la décoloration du résidu soit V1 ce volume.
5.1.2. Lavage :
Le mélange est transvasé dans une ampoule à décanter avec l’ajout de 25 ml d’Hexane et 20
ml d’eau distillée.
Après la décantation on procède à une légère agitation de 30 à 60 secondes. Il résulte alors la
séparation de 2 phases : phase organique et phase aqueuse.
La phase aqueuse est reéxtraite 2 à 3 fois par 40 ml de solvant Ethanol-Hexane (1 :1), à
chaque fois la phase organique obtenue est rajoutée à la première phase organique.
L’ensemble des phases organiques est lavé avec de l’Hexane 2 à 3 fois et filtré, en présence
de Na2 So4 qui est additionné au filtrat pour éliminer l’humidité.
La solution obtenue est évaporée dans un rota-vapor à 40°C pour la récupération de l’Hexane.
5.1.3. Saponification :
Après l’évaporation du solvant, nous procédons à la saponification qui consiste à l’ajout d’un
volume égale de KOH méthanoïque 10%.
Le mélange est chauffée pendant 10 min sur une plaque chauffante à 40°C puis refroidi
rapidement avec de la glace.
Après la saponification, on passe au lavage avec l’Hexane, et à la fin on ajuste le volume a 25
ml avec de l’Hexane.
Le concentré de chaque échantillon est mis dans un spectrophotomètre pour déterminer leurs
absorbance est donc déterminer leurs teneurs en caroténoïdes.
6-Dosage par spectrophotométrie des caroténoïdes ; représenté par le β-carotène
(protocole de 4eme année alimentation nutrition, 2014) :
6.1. Mode opératoire :
6.1.1. Préparation de la gamme étalon :
La gamme étalon est celle adoptée par BENK (1960).
-La solution de bichromate de potassium standard est préparée par dissolution de 0.036g dans
100 ml ; chaque ml de la solution correspond à 0.0266mg de caroténoïdes totaux calculés
comme β-carotène.
- On a donc une solution d’une concentration de 26.6 mg/l de caroténoïdes, à partir de
laquelle on prépare nos différents standards aux différentes concentrations (mg/L) :