Chapitre II
Matériel & méthode
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II.5. Etude du phytoplancton
Les échantillons prélevés sont traités conformément à la norme NF EN 15.204 de 2016 ;
norme guide pour le dénombrement du phytoplancton par microscopie inversée.
II.5.1. Principe d’analyse
Les protocoles appliqués pour la reconnaissance et le comptage des cellules s'inspirent
des lignes directrices de la norme NF EN 15204 fondée sur la technique de sédimentation
classique telle qu’elle est définie par Utermöhl en 1958. Cette méthode consiste à faire
sédimenter les micro-algues (et les autres particules) contenues dans un échantillon de volume
connu sur le fond d’une chambre de sédimentation (lame mince).
II.5.2. Préparation des échantillons pour analyse
 Nettoyage du matériel
Entre deux utilisations, les chambres de sédimentation sont nettoyées à l’éthanol (90%) à
l’aide d’un petit écouvillon, puis elles sont rincées à l’eau distillée. Les chambres sont ensuite
laissées à sécher. Il est fait de même pour les lames de verre rondes.
 Atteinte de l’équilibre thermique
Afin de permettre une distribution aléatoire du plancton après sédimentation dans le fond de la
cuve, il convient que l’échantillon et tout le matériel utilisé soient à des températures similaires.
Pour ce faire, l’échantillon traité et le matériel sont entreposés dans la salle dans laquelle se fera
le comptage environ 12h00 avant le début du comptage, d'où l'utilité de stocker à température
ambiante l'échantillon en attente d'analyse.
II.5.2. 1. Homogénéisation de l’échantillon
Afin de remettre en suspension l’échantillon après un stockage de plus ou moins longue
durée, il est nécessaire d’agiter le flacon contenant l’échantillon à traiter.
L’agitation est faite manuellement pendant une quinzaine de secondes, et comprends 30
retournements verticaux et horizontaux du flacon. Cette agitation ne doit pas être trop
vigoureuse de façon à ne pas entraîner la désintégration des colonies fragiles.
Ces deux dernières étapes sont extrêmement importantes pour la qualité du résultat.
II.5.2.2. Remplissage de la chambre de sédimentation
Le remplissage de la chambre doit se faire aussitôt après l’homogénéisation (pour éviter
d’exclure du prélèvement des taxons sédimentant rapidement). Un aliquote de 25 ml est
rapidement versé en une seule fois dans la chambre de sédimentation, jusqu’à l’obtention d’un
léger excès d’eau provoquant un ménisque convexe à la surface de la chambre. Ce surplus d’eau
est aussitôt chassé avec le glissement de la lame supérieure, tout en faisant attention à ne pas
enfermer de bulle d’air dans la chambre. Il est en même temps épongé par un papier absorbant.
Il faut veiller à ce que le surplus d’eau ne s’écoule pas le long de la chambre, faisant
courir le risque qu’un écoulement sous la lamelle d’observation, ne la salisse pas, et nuise à