Chapitre II
Matériel & méthode
31
o Mesure des absorbances
Les mesures des absorbances sont effectuées sur le surnageant acétonique à l’aide d’un
spectrophotomètre aux longueurs d’ondes (665 et 750 nm), avant et après acidification avec de
l’acide chlorhydrique à 0,3 N (STRICKLAND et PARSONS, 1972). Afin d’estimer la
précision de la mesure, trois (03) réplicas pour chaque échantillon ont été effectués.
La concentration en chlorophylle a, exprimée en microgramme par litre (µg/l), et
calculée suivant l’équation usuelle de Lorenzen (1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983) :
Avec:
- V : volume d’eau filtré en (litre) ;
- v : volume d'acide chloridrique en (millilitre) ;
- L : longueur du chemin optique de la cuve de mesure, (1cm) ;
- 𝐴 665
𝑁𝐴
= 𝐴 665
𝑁𝐴
− 𝐴 750
𝑁𝐴 ;
- 𝐴 665
𝐴
= 𝐴 665
𝐴
− 𝐴 750
𝐴 .
et
- 𝐴 665
𝑁𝐴 : Absorbance à 665 nm avant acidification ;
- 𝐴 665
𝐴 : Absorbance à 665nm après acidification ;
- 𝐴 750
𝑁𝐴 : Absorbance à 750 nm avant acidification ;
- 𝐴 750
𝐴 : Absorbance à 750 après acidification.
Ces estimations de pigments a, peuvent être faussées par la présence de chlorophylle b,
à cause de la proximité des bandes d’absorption des chlorophylles a et b (Botto et Bunt, 1978).
Figure 17 : A. Centrifugation, B. Mesure de l’absorbance dans un spectrophotomètre.
(ENNSMAL, 2019)
[𝑪𝒉𝒍𝒐𝒓𝒐𝒑𝒉𝒚𝒍𝒍𝒆 − 𝒂] (
𝝁𝒈
𝒍
) = 𝟐𝟕, 𝟕. (𝑨 𝟔𝟔𝟓
𝑵𝑨
− 𝑨 𝟔𝟔𝟓
𝑨
) 𝒗/𝑽. 𝑳
A
B