Chapitre II
Matériel & méthode
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constitué d'une base support-filtre surmontée d'un entonnoir amovible entre lesquels est pincé
le disque membrane filtrant. Pour éviter tout éclatement des mailles des filtres ou des cellules
vivantes la filtration est toujours effectuée avec des dépressions inférieures à 300 mm de
mercure (Aminot et Chaussepied, 1983). On dépose 1 à 2 ml de suspension de carbonate de
magnésium à 1% avant la filtration, ce qui permettra d’améliorer la rétention sur les filtres et
pour éviter une acidification des matières filtrées avant et pendant l’extraction (Aminot et
Kérouel, 2004).
Chaque filtre contenant le filtrat est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant
le code de l’échantillon et la date de prélèvement), ils sont immédiatement conservés à –20° C,
et à l’obscurité jusqu’au moment du dosage.
o Extraction des pigments
L’extraction des pigments est réalisée selon la méthode de Lorenzen (1967) in (Aminot
et Chaussepied, 1983). Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue
dans des tubes en verre contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du
papier aluminium. Les filtres sont déchiquetés à l’aide d’une baguette en verre à brisure nette.
Après agitation pour disperser les fibres, les tubes sont immédiatement placés au réfrigérateur
(environ 4° C), pour laisser l’extraction se poursuivre une vingtaine d’heures.
Figure 16 : Dosage de la chlorophylle a (A : filtration, B: Extraction). (LNCAPPASM, 2019).
o Centrifugation
La centrifugation des tubes est faite à 3000 tours/min pendant 3 min pour clarifier les extraits,
on stoppe la centrifugation pour faire tomber les fibres collées à la paroi des tubes sans remettre
en suspension ce qui est déjà au fond. On centrifuge les tubes à nouveau 10 min à 3000
tours/min.
A
B