Chapitre II
Matériel & méthode
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II.4.Analyse des paramètres biologiques
II.4.1. Dosage de la chlorophylle a
La chlorophylle a n’a pas pu faire l’objet de mesures continues durant toute la période
d’étude, en raison d’indisponibilité des réactifs ; les échantillons traités sont ceux qui ont été
échantillonnés entre le 14 avril et le 16 juin 2019 (12 échantillons).
II.4.1. 1. Méthode et principe de dosage de la chlorophylle a
La détermination quantitative globale de la fraction particulaire vivante dans les
milieux aquatiques est importante pour l’étude et la compréhension des phénomènes
écologiques. En effet, une estimation quantitative du phytoplancton par voie chimique, par
extraction et détermination des pigments photosynthétiques s’avère satisfaisante (Aminot et
Chaussepied, 1983). Les pigments phytoplanctoniques sont mesurés en fonction de leurs
caractéristiques spectroscopiques : absorption de la lumière (spectrophotométrie) ou
fluorescence (fluorimétrie). Il existe des techniques non séparatives (spectrophotométrie et
fluorimétrie) ou bien séparatives : chromatographie à haute performance (HPLC) (Aminot et
Kerouel, 2004).
Durant notre travail, nous avons opté pour la méthode de spectrophotométrie pour le
dosage de la chlorophylle a, et ce selon la disponibilité d’appareil de mesure au laboratoire.
Cette méthode consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera ensuite
immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis on mesure l’absorbance
dans un spectrophotomètre avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied,
1983).
 Réactifs
La mesure de la chlorophylle « a » repose sur la préparation des réactifs suivants (les détails
sont en Annexes n°3) :
- Solvant d'extraction : acétone analytique à 90% ;
- Solution d'acide chloridrique à 0,3 N.
 Précautions particulières
La chlorophylle a est peu sensible à la pollution atmosphérique mais très sensible à la
dégradation par la lumière. Toutes les étapes (préparation des réactifs et des échantillons)
doivent être réalisées le plus tôt possible à l’abri de la lumière et de la chaleur, sous hotte
aspirante, où Il ne doit pas y avoir de manipulation d’acide afin éviter toute contamination.
II.4.1.2.Mode opératoire de dosage de la chlorophylle a
o Filtration et extraction
Les échantillons de un litre sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de verre (type
Wattman GF/C, diamètre 47 mm) d’une porosité de 0,45 μm. Le dispositif de filtration est