Matériel et méthodes
Page | 32
II.3. Prévalence de la résistance aux béta-lactamines dans l’eau
L’évaluation de la résistance à six molécules de béta-lactamines (AMX, TIC, CTX, CAZ,
FOX et IMP) a été réalisée chez la flore totale et les coliformes totaux de l’eau. Après filtration
de 100ml d’échantillon, les membranes ont été déposées sur le Mueller Hinton (flore totale) ou
le tergitol (coliformes) additionné de l’un des antibiotiques : AMX, TIC, CTX, CAZ, FOX et
IMP à des concentrations de 64 µg/ml sauf pour l’AMX et L’IMP où la concentration a été de
32 et 16 µg/ml respectivement.
Les mêmes concentrations ont été préparées sur Hécktoen pour isolées les bactéries
résistantes à partir de la moule.
Les bactéries isolées feront l’objet d’une caractérisation de leur mécanisme de résistance.
II.4. Caractérisation de la résistance chez les bactéries isolées de la moule et de son milieu
Sur une collection de 19 bactéries (8 souches isolées de la moule et 11 souches isolées de
l’eau de mer), nous avons effectué les tests suivants :
II.4.1. Identification biochimique bactériennes par galerie API 20 E
o Principe
La galerie API 20 E est un système d’identification des entérobactéries et autres bacilles à
Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés prêt à l’emploi.
Les milieux desséchés sont réhydratés avec la suspension bactérienne à identifiée. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs (Biomérieux).
o Technique
 Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau distillée
dans les alvéoles pour crée une atmosphère humide.
 Retirer stérilement la galerie de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation.
 Inscrire nom, référence de la souche et date sur la languette latérale du fond de la boite.
 Préparer l’inoculum bactérien : réaliser une suspension bactérienne en prenant 1 à 3
colonies bien isolées dans 5 ml d’eau physiologique stérile.
 Inoculer la galerie comme suit :
 Remplir à l’aide d’une micropipette les tubes et cupules des tests CIT, VP, GEL.
 Remplir uniquement les tubes des autres tests.