Matériel et méthodes
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 Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LCD, ODC, H 2 S, URE en remplissant leur
cupule d’huile de vaseline.
 Refermer la boite d’incubation et la placer dans l’étuve à 35± 2°C pendant 24 heures.
o Lecture de la galerie
La lecture de ces galeries API 20E se fait selon les indications du fournisseur (voir la
notice d’utilisation des galeries). Après codification des réactions en un profil numérique, on se
réfère à un catalogue analytique fourni par Biomérieux où l’identification est donnée avec un
pourcentage et une appréciation.
II.4.2. L’antibiogramme par la méthode de diffusion d’antibiotiques en milieu gélosé
o Principe
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques a été réalisée par la méthode
de diffusion en milieu gélosé (CA-SFM, 2008). Cette technique est basée sur l’observation de la
croissance bactérienne en présence d’un gradient de concentration d’antibiotique obtenu par
diffusion à partir des disques imprégnés d’antibiotique dans un milieu gélosé. Ce gradient est
inversement proportionnel à la distance par rapport aux disques.
La croissance des bactéries dessine des halos d’inhibition au tour du disque. La croissance
bactérienne s’arrête en présence de la concentration minimale d’inhibition (CMI) autour du
disque d’antibiotique (Courvalin et al., 1985).
o Technique
A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5McFarland (10
8
cellules/ml).
Ajuster l’inoculum à 10
7
cellules/ml
Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10
7
cellules/ml,
Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée et en
tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne distribution de l’inoculum,
Appliquer les disques d’antibiotiques (Annexe 2) à l’aide d’un distributeur stérile selon le
schéma de la figure 8.
Laisser diffuser pendant 15 minutes, à température ambiante,
Incuber à 35°C pendant 18-24.