Matériel et méthodes
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-Test présomptif
1
ère
série : 3 tubes de 10 ml de Rothe double concentration + 10 ml de l’eau de mer à analyser.
2
ème
série : 3 tubes de 10 ml de Rothe simple concentration + 1 ml de l’eau de mer à analyser.
3
ème
série : 3 tubes de 10 ml de Rothe simple concentration + 1 ml de la dilution 10
-1
.
-Test confirmatif
Chaque tube positif est ensemencé sur le milieu Litsky qui contient non seulement de
l’azide de sodium mais également de l’éthyle violet donc plus sélectif pour la mise en
évidence des streptocoques fécaux. Après 24 heures d’incubation à 35±2°C, Les tubes
présentant un trouble accompagné ou non d’une pastille violette au fond du tube confirment
la présence des streptocoques fécaux. Les résultats sont exprimés en nombre de streptocoques
par 100 ml d’eau de mer (Rodier, 2005).
II.2.3.2.3. Recherche des germes pathogènes : Salmonella
La recherche des salmonelles a été effectuée dans 100ml d’eau selon le protocole
suivant :
-Un préenrichissement : Ajouter 100ml d’échantillon à 100ml d’eau peptonée tamponnée stérile
Puis incuber à 37 °C pendant 24h.
-Un Enrichissement : À partir de la culture précédente transférez simultanément :
◙ 10 ml dans un tube de bouillon au sélénite-cystine (SFB) double concentration
contenant 2 disques de l’additif SFB.
◙ 1 ml dans un tube bouillon au sélénite-cystine (SFB) simple concentration additionné d’un
disque de l’additif SFB. Incubation à 37 °C pendant 16-18 heures.
-Isolement : Après incubation de 16h à 37°C, un isolement est effectué à partir des tubes SFB
D/C ou S/C sur la gélose Hécktoen.
-Lecture et confirmation : Les Salmonelle ne fermentant
ni le lactose ni le
saccharose vont apparaître sous forme de colonies bleu verdâtre avec ou sans centre noir.
Sélectionner et prélever les colonies présomptives et procéder à l’identification biochimique
par galerie API 20E.