Matériel et méthodes
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-Un Enrichissement : À partir de la culture précédente on transfère simultanément :
◙ 10 ml dans un tube de bouillon au sélénite-cystine (SFB) double concentration
contenant 2 disques de l’additif SFB.
◙ 1 ml dans un tube bouillon au sélénite-cystine (SFB) simple concentration additionné d’un
disque de l’additif SFB. Incubation à 37 °C pendant 16-18 heures.
-Isolement : Après incubation de 16h à 37°C, un isolement est effectué à partir des tubes SFB
D/C ou S/C sur la gélose Hécktoen.
-Lecture et confirmation : Les Salmonelle ne fermentant ni le lactose ni le saccharose vont
apparaître sous forme de colonies bleu verdâtre avec ou sans centre noir.
Sélectionner et prélever les colonies présomptives et procéder à l’identification biochimique
par galerie API 20E.
II.2.3.2. Analyse microbiologique de l’eau
II.2.3.2.1. Recherche des coliformes totaux, fécaux et E.coli
La qualité microbiologique de l’eau prélevée a été déterminée en recherchant les coliformes
totaux, les coliformes thermotolérants et E.coli. Cette méthode consiste en la filtration de 100
ml d’échantillon ou de dilution sur une membrane en esters de cellulose, de porosité 0,45 µm
placée dans une rampe de filtration en inox de six postes. La membrane est déposée sur la
surface d’un milieu contenant le lactose (milieu au tergitol). Les colonies fermentant le lactose
sont dénombrés et le résultat est exprimé en UFC /100ml
Technique :
Agiter soigneusement le flacon d'eau à analyser et filtrer stérilement 100ml
d’échantillon.
Déposer la membrane à la surface d’une gélose au tergitol.
La recherche des coliformes totaux s’effectue à 35±2°C pendant 24-48h, alors que les
coliformes thermotolérants sont recherchés à une température de 44°C pendant 24-48h.
II.2.3.2.2. Recherche des Streptocoques fécaux (Enterococcus) :
Leur recherche c’est faite de la même façon que pour les moules, par la méthode des NPP à trois
tubes le milieu de Rothe en simple et double concentration Le milieu de Rothe contient de
l’azide de sodium qui est considéré comme agent sélectif pour la recherche des Enterococcus
(Rodier, 2005).