Matériel et méthodes
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II.2.3.1.2. La recherche des germes fécaux par la méthode des NPP (Nombre le Plus
Probable)
La méthode utilisée pour la détermination des coliformes et des Enterococcus est la
méthode de fermentation en tubes multiples qui est basée sur l’ensemencement d’une série
de trois tubes contenant des milieux de culture liquides, puis sur la détermination du nombre
le plus probable à partir des tubes positifs en se référant à la table de trois tubes des
probabilités spéciale coquillages (Delarras, 2003).
II.2.3.1.2.1. Recherche des coliformes totaux
La recherche des coliformes totaux a été effectuée par la méthode des NPP sur BVBL
(Delarras, 2003). On a ensemencé trois séries de 3 tubes de BVBL simple concentré avec 1 ml
des solutions 1/3, 1/30 et 1/300.
Incubation de 24-48h à 37°C a été effectuée.
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* Lecture
 Une croissance microbienne se traduisant par une formation d’un trouble avec
production de gaz dans la cloche de Durham est considérée comme une réaction
positive pour la recherche des coliformes totaux.
 Le nombre de tubes positifs dans chaque série est reporté dans la table des NPP
spécifique aux coquillages pour obtenir le nombre de coliformes totaux présents
dans 100 g de chair et de liquide intervalvaire (Delarras, 2003).
II.2.3.1.2.2.Recherche et dénombrement des coliformes thermotolérants –Escherichia coli
A partir des tubes BVBL positifs (moule), on réalise le test de Mackenzie : C’est
l’ensemencement d’un tube de BVBL et un autre d’eau peptonée exempte d’indole. La recherche
des coliformes fécaux et d’E.coli se fait après l’incubation à 44 °C pendant 24 -48h.
* Lecture
 Une croissance avec dégagement de gaz dans la cloche de Durham est
confirmative de la présence de coliformes fécaux.
 La production d’indole qui se traduit par l’apparition d’un anneau rouge, après ajout du
réactif de Kovac, dans l’eau peptonée exempt d’indole est indicatrice de la présence
d’E. coli.