Matériel et méthodes
29
o Virage de couleur vers le jaune.
o Présence d’un gaz dans la cloche de Durham (le volume du gaz doit être
supérieur au 1/10 du volume de la cloche).
• Test de confirmation :
- Porter successivement dans chacun des trois tubes de la première série 1 ml de la
suspension mère au 10
-1 dans chacun des trois tubes de la première série.
- Puis dans chacun des trois tubes de la deuxième série 1 ml de la dilution 10
-2 .
- Et dans chacun des trois tubes de la troisième série 1 ml de la dernière dilution
10
-3 .
- Chasser le gaz de la cloche de Durham et bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- Incuber à 44°C pendant 24 heures.
▪ Lecture : Un tube positif présent :
o Trouble microbien.
o Présence du gaz au niveau de la cloche (volume du gaz > 1/10 volume
de la cloche).
• La recherche d’E.coli :
A l’aide d’une pipette pasteur prendre 1 ml des tubes considérés comme positifs des deux
échantillons au dénombrement des coliformes fécaux et repiquer dans les tubes contenant le
milieu Schubert muni d’une cloche de Durham pour recueillir les gaz produits pendant
l’incubation. Chasser le gaz et bien mélanger le milieu et l’inoculum, puis incuber à 44°C
pendant 24 heures.
▪ Lecture : un tube est considéré comme positif lorsqu’il présente :
o Trouble microbien.
o Présence du gaz.
Test de Mac Kenzie : la présence d’E.coli est indiquée par la formation d’un anneau rouge à
la surface après adjonction de quelques gouttes du réactif de Kovacs, indiquant la formation
de l’indole à partir du tryptophane à 44°C pendant 24 heures.
La lecture finale se fait selon les prescriptions de la table de Mac Grady (annexe 3)
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o Virage de couleur vers le jaune.
o Présence d’un gaz dans la cloche de Durham (le volume du gaz doit être
supérieur au 1/10 du volume de la cloche).
• Test de confirmation :
- Porter successivement dans chacun des trois tubes de la première série 1 ml de la
suspension mère au 10
-1 dans chacun des trois tubes de la première série.
- Puis dans chacun des trois tubes de la deuxième série 1 ml de la dilution 10
-2 .
- Et dans chacun des trois tubes de la troisième série 1 ml de la dernière dilution
10
-3 .
- Chasser le gaz de la cloche de Durham et bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- Incuber à 44°C pendant 24 heures.
▪ Lecture : Un tube positif présent :
o Trouble microbien.
o Présence du gaz au niveau de la cloche (volume du gaz > 1/10 volume
de la cloche).
• La recherche d’E.coli :
A l’aide d’une pipette pasteur prendre 1 ml des tubes considérés comme positifs des deux
échantillons au dénombrement des coliformes fécaux et repiquer dans les tubes contenant le
milieu Schubert muni d’une cloche de Durham pour recueillir les gaz produits pendant
l’incubation. Chasser le gaz et bien mélanger le milieu et l’inoculum, puis incuber à 44°C
pendant 24 heures.
▪ Lecture : un tube est considéré comme positif lorsqu’il présente :
o Trouble microbien.
o Présence du gaz.
Test de Mac Kenzie : la présence d’E.coli est indiquée par la formation d’un anneau rouge à
la surface après adjonction de quelques gouttes du réactif de Kovacs, indiquant la formation
de l’indole à partir du tryptophane à 44°C pendant 24 heures.
La lecture finale se fait selon les prescriptions de la table de Mac Grady (annexe 3)