Matériel et méthodes
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- 1ml de la suspension mère est transféré aseptiquement dans le tube 10
-2 , la pipette ne devant
pas pénétrer dans le diluant.
- A l’aide d’une deuxième pipette stérile de 1ml, à partir du tube à la dilution 10
-2 , 1 ml est
prélevé puis transféré dans un tube contenant 9 ml de diluant, c’est la dilution 10
-3 .
- Se débarrasser de 1 ml de la dernière dilution pour avoir un volume équivalent dans les 3
tubes.
3.3.3. Recherche et dénombrement des Coliformes totaux et fécaux
➢ Principe :
Les coliformes se présentent sous forme de bacilles à Gram négatif, non sporogènes, oxydase
négative, aéro-anaérobie facultatifs, capables de croitre en présence de sels biliaires et
capables de fermenter le lactose avec production d’acide et de gaz, en 24 à 48 heures à 37°C.
La recherche et le dénombrement des coliformes peuvent se faire selon deux méthodes au
choix, soit en milieu liquide ou par filtration sur membrane.
Dans notre cas, nous avons choisi la méthode de recherche en milieu liquide, cette méthode
fait appel à deux tests consécutifs, à savoir :
▪ Test présomptif : le milieu utilisé est le BCPL avec une cloche de durham, c’est un
milieu non sélectif et non enrichi utilisé pour la recherche des coliformes totaux.
▪ Test confirmatif : le milieu utilisé est le BLBVB avec une cloche de Durham, c’est un
bouillon sélectif utilisé pour la recherche des coliformes fécaux.
➢ Mode opératoire :
La technique de NPP consiste à préparer une série de 9 tubes pour chaque échantillon
contenant le milieu plus la cloche de Durham.
▪ Test de présomption :
- Porter successivement dans chacun des trois tubes de la première série 1 ml de la
suspension mère au 10
-1 dans chacun des trois tubes de la première série.
- Puis dans chacun des trois tubes de la deuxième série 1 ml de la dilution 10
-2 .
- Et dans chacun des trois tubes de la troisième série 1 ml de la dernière dilution
10
-3 .
- Chasser le gaz de la cloche de Durham et bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- Incuber à 37°C pendant 24 à 48 heures.
▪ Lecture : Un tube positif présent :
o Trouble microbien.
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- 1ml de la suspension mère est transféré aseptiquement dans le tube 10
-2 , la pipette ne devant
pas pénétrer dans le diluant.
- A l’aide d’une deuxième pipette stérile de 1ml, à partir du tube à la dilution 10
-2 , 1 ml est
prélevé puis transféré dans un tube contenant 9 ml de diluant, c’est la dilution 10
-3 .
- Se débarrasser de 1 ml de la dernière dilution pour avoir un volume équivalent dans les 3
tubes.
3.3.3. Recherche et dénombrement des Coliformes totaux et fécaux
➢ Principe :
Les coliformes se présentent sous forme de bacilles à Gram négatif, non sporogènes, oxydase
négative, aéro-anaérobie facultatifs, capables de croitre en présence de sels biliaires et
capables de fermenter le lactose avec production d’acide et de gaz, en 24 à 48 heures à 37°C.
La recherche et le dénombrement des coliformes peuvent se faire selon deux méthodes au
choix, soit en milieu liquide ou par filtration sur membrane.
Dans notre cas, nous avons choisi la méthode de recherche en milieu liquide, cette méthode
fait appel à deux tests consécutifs, à savoir :
▪ Test présomptif : le milieu utilisé est le BCPL avec une cloche de durham, c’est un
milieu non sélectif et non enrichi utilisé pour la recherche des coliformes totaux.
▪ Test confirmatif : le milieu utilisé est le BLBVB avec une cloche de Durham, c’est un
bouillon sélectif utilisé pour la recherche des coliformes fécaux.
➢ Mode opératoire :
La technique de NPP consiste à préparer une série de 9 tubes pour chaque échantillon
contenant le milieu plus la cloche de Durham.
▪ Test de présomption :
- Porter successivement dans chacun des trois tubes de la première série 1 ml de la
suspension mère au 10
-1 dans chacun des trois tubes de la première série.
- Puis dans chacun des trois tubes de la deuxième série 1 ml de la dilution 10
-2 .
- Et dans chacun des trois tubes de la troisième série 1 ml de la dernière dilution
10
-3 .
- Chasser le gaz de la cloche de Durham et bien mélanger le milieu et l’inoculum.
- Incuber à 37°C pendant 24 à 48 heures.
▪ Lecture : Un tube positif présent :
o Trouble microbien.