Chapitre II : Matériel et méthodes
-31Etape 2 : Hybridation des amorces
Elle se fait à une température qui sera définie selon la longueur des amorces, elle peut varier de
40°C à 70°C, cet abaissement de la température permettra aux liaisons hydrogènes de se reformer
(entre les amorces et le brin d’ADN).
Les amorces étant courtes, s’hybrident plus facilement aux séquences complémentaires que les
longs brins de l’ADN matriciel entre eux.
Etape3 : Elongation
Elle s’effectue à 72°C, à ce moment, l’ADN polymérase se lie à l’ADN amorcé et allonge les
amorces dans le sens 5’- 3’ en utilisant les désoxyribonucléotides triphosphates (dNTP) présentes
dans le mélange réactionnel par formation d’un pont phosphodiester ente le 3’ OH de la chaine et le
5’ phosphate du désoxynucléotide suivant (Branger, 2007)
Ce cycle est répété n fois (fig. 2.5) en appliquant les mêmes températures.
Figure 2.5: schéma des cycles de la PCR
4.3.5.3. Electrophorèse
C’est une technique qui permet de séparer des fragments d’ADN (obtenus par amplification) de
différentes tailles en les faisant migrer dans un gel d’agarose immergé dans un tampon à pH=8.3 et
soumis à un champs électrique (Tagu et Moussard, 2003)
Les molécules d’ADN chargées négativement migrent vers l’anode et leurs vitesse est inversement
proportionnelle à leurs taille ; les petits fragments migrent plus rapidement et donc plus loin que les
fragments de grande taille.