Chapitre deuxièmes :
Matérielles et méthodes
27
Mode opératoire :
• Des tubes de King A et King B sont ensemencés, on verse de l’huile de paraffine à la
surface ce qui va former une épaisse couche.
• Incuber les tubes King A et King B à 41°C pendant 24 heures
N.B : la couche formée par l’huile de paraffine à la surface du tube ne permet pas le passage
des molécules d’oxygène au fond du tube.
II.2.6.3. Tests complémentaires pour la recherche d’Aeromonas (Clave, 2010) :
Les tests suivants sont utilisés pour confirmer ou infirmer la présence d’Aeromonas :
• Croissance sur milieu S-S : ce milieu est inhibiteur des bactéries du genre Aeromonas.
• Croissance sur PCA hypersalé (6,5%) de Na Cl : Absence de croissance sur ce milieu.
• Croissance sur Hektoen: les colonies sont jaunes car elles fermentent le saccharose.
L’ensemencement sur ces géloses est fait par stries. Les boîtes sont incubées à 37°C pendant
24 à 48 heures.
• Vérification du caractère psychrophile des colonies : le test est réalisé par un
ensemencement en spot et l’incubation s’est faite au réfrigérateur à 10°C pendant 2
semaines.
Les milieux S-S, PCA hypersalé (6,5%) de NaCl, Hektoen ont servi la confirmation ou
l’infirmation des Aeromonas. L’ensemencement sur ces géloses s’est fait par stries
Aeromonas (technique des quadrants).
II.2.7. Techniques d’identification bactérienne :
II.2.7.1. Technique de coloration de Gram :
préparation du frottis : mettre une goutte d’eau distillée stérile sur une lame propre,
prélever un fragment d’une colonie bactérienne isolée et procéder à l’étalement sur la lame
• sécher la lame sur une plaque chauffante
Fixation :
• tenir la lame avec une pince en bois et la passer trois fois à la flamme avec la lame.
Cette démarche consiste à neutraliser les bactéries, à rendre les membranes plus
perméables, à fixer les structures sans les altérer et contribuer à l’adhésion du frottis
sur la lame.
Matérielles et méthodes
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Mode opératoire :
• Des tubes de King A et King B sont ensemencés, on verse de l’huile de paraffine à la
surface ce qui va former une épaisse couche.
• Incuber les tubes King A et King B à 41°C pendant 24 heures
N.B : la couche formée par l’huile de paraffine à la surface du tube ne permet pas le passage
des molécules d’oxygène au fond du tube.
II.2.6.3. Tests complémentaires pour la recherche d’Aeromonas (Clave, 2010) :
Les tests suivants sont utilisés pour confirmer ou infirmer la présence d’Aeromonas :
• Croissance sur milieu S-S : ce milieu est inhibiteur des bactéries du genre Aeromonas.
• Croissance sur PCA hypersalé (6,5%) de Na Cl : Absence de croissance sur ce milieu.
• Croissance sur Hektoen: les colonies sont jaunes car elles fermentent le saccharose.
L’ensemencement sur ces géloses est fait par stries. Les boîtes sont incubées à 37°C pendant
24 à 48 heures.
• Vérification du caractère psychrophile des colonies : le test est réalisé par un
ensemencement en spot et l’incubation s’est faite au réfrigérateur à 10°C pendant 2
semaines.
Les milieux S-S, PCA hypersalé (6,5%) de NaCl, Hektoen ont servi la confirmation ou
l’infirmation des Aeromonas. L’ensemencement sur ces géloses s’est fait par stries
Aeromonas (technique des quadrants).
II.2.7. Techniques d’identification bactérienne :
II.2.7.1. Technique de coloration de Gram :
préparation du frottis : mettre une goutte d’eau distillée stérile sur une lame propre,
prélever un fragment d’une colonie bactérienne isolée et procéder à l’étalement sur la lame
• sécher la lame sur une plaque chauffante
Fixation :
• tenir la lame avec une pince en bois et la passer trois fois à la flamme avec la lame.
Cette démarche consiste à neutraliser les bactéries, à rendre les membranes plus
perméables, à fixer les structures sans les altérer et contribuer à l’adhésion du frottis
sur la lame.