Chapitre deuxièmes :
Matérielles et méthodes
26
Une goutte de la suspension bactérienne est prélevée puis ensemencée en stries par la
technique des quatre quadrants sur le milieu approprié.
II.2.6. Tests de caractérisation :
L’isolement de Pseudomonas aeruginosa et Aeromons présumés n’a pas permis la sélection
de colonies bien isolées sur les géloses King A et B et Columbia au sang. Cinq repiquages
successifs ont été réalisés. Des tests complémentaires ont été réalisés
Les boites de gélose Columbia sont incubées à 37°C celles de King A et B sont incubés à
température ambiante et à 41°C.
II.2.6.1. Tests complémentaires pour la caractérisation de Pseudomonas aeruginosa :
Les tests suivants ont été effectués en vue de confirmer la présence de Pseudomonas
aeruginosa :
• La coloration de Gram,
• la recherche de la catalase et de l’oxydase
• La production des deux pigments (la fluorescéine et la pyocyanine) sur les milieux
King,
• la croissance à 41-42 °C,
• l’aérobiose stricte,
• la croissance sur le milieu Muller Hinton avec production de fluorescéine
Pour améliorer l’isolement de Pseudomons aeruginosa toutes les boîtes sont incubées à 41°C
et de l’acide salicylique a été additionné au diluant. Cet ajout est destiné à désintégrer le biofilm
et d’obtenir des colonies bien isolées. Après incubation et apparition du trouble, une goutte de
la suspension bactérienne est prélevée puis ensemencée en stries par la technique des quatre
quadrants sur chaque milieu.
II.2.6.2.Test d’anaérobiose pour le genre pseudomonas :
Principe : Les bactéries du genre pseudomonas sont aérobies strictes, on a essayé par ce test
de prévoir l’absence de culture pure du genre pseudomonas sp dans des milieux anaérobies.
Matérielles et méthodes
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Une goutte de la suspension bactérienne est prélevée puis ensemencée en stries par la
technique des quatre quadrants sur le milieu approprié.
II.2.6. Tests de caractérisation :
L’isolement de Pseudomonas aeruginosa et Aeromons présumés n’a pas permis la sélection
de colonies bien isolées sur les géloses King A et B et Columbia au sang. Cinq repiquages
successifs ont été réalisés. Des tests complémentaires ont été réalisés
Les boites de gélose Columbia sont incubées à 37°C celles de King A et B sont incubés à
température ambiante et à 41°C.
II.2.6.1. Tests complémentaires pour la caractérisation de Pseudomonas aeruginosa :
Les tests suivants ont été effectués en vue de confirmer la présence de Pseudomonas
aeruginosa :
• La coloration de Gram,
• la recherche de la catalase et de l’oxydase
• La production des deux pigments (la fluorescéine et la pyocyanine) sur les milieux
King,
• la croissance à 41-42 °C,
• l’aérobiose stricte,
• la croissance sur le milieu Muller Hinton avec production de fluorescéine
Pour améliorer l’isolement de Pseudomons aeruginosa toutes les boîtes sont incubées à 41°C
et de l’acide salicylique a été additionné au diluant. Cet ajout est destiné à désintégrer le biofilm
et d’obtenir des colonies bien isolées. Après incubation et apparition du trouble, une goutte de
la suspension bactérienne est prélevée puis ensemencée en stries par la technique des quatre
quadrants sur chaque milieu.
II.2.6.2.Test d’anaérobiose pour le genre pseudomonas :
Principe : Les bactéries du genre pseudomonas sont aérobies strictes, on a essayé par ce test
de prévoir l’absence de culture pure du genre pseudomonas sp dans des milieux anaérobies.