Chapitre deuxièmes :
Matérielles et méthodes
23
L'incubation : se fait à 37° C et à température ambiante (25° C) pendant 48h.
La gélose King A
Principe :
La gélose King A permet la production de pyocyanine, pigment bleu sous lumière UV laquelle
est due spécifiquement à Pseudomonas aeruginosa. Elle est favorisée par la présence d'ions
inorganiques dans le milieu
La gélose King B
Principe :
La gélose King B permet la production de fluorescéine (ou pyoverdine), pigment jaune vert
fluorescent sous lumière ultra-violette, par certains Pseudomonas. La production de pyoverdine,
est favorisée par une teneur élevée en phosphate. Pseudomonas aeruginosa produit ce pigment
fluorescent contrairement à certaines espèces de Pseudomonas qui n’en produisent pas.
Lecture :
Les colonies de P. aeruginosa (commun aussi aux espèces du groupe P.fluorescens) sont plates,
à bord irrégulier et prenant un aspect irisé métallique avec le temps, elles présentent une
pigmentation caractéristique bleue ou bleu-vert et une fluorescence sous ultra-violets à 254 nm.
La lecture a été réalisée grâce à une table UV.
II.2.4.5. Recherche des Vibrio :
La gélose au Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose (TCBS) constitue un milieu sélectif destiné à
l’isolement de Vibrio cholerae et des autres vibrions entéropathogènes (en particulier Vibrio
parahaemolyticus) dans les poissons, les produits de la mer et les autres prélèvements
biologiques d’origine animale (Anonyme5).
Principe :
Les concentrations élevées en thiosulfate et en citrate de sodium ainsi que la forte alcalinité du
milieu inhibent fortement la croissance des entérobactéries.
- La bile de bœuf et le cholate de sodium ralentissent la culture des entérocoques et inhibent le
développement des germes à Gram positif.
- Par acidification du milieu, résultant de la fermentation du saccharose, les Vibrio provoquent
le virage au jaune de l’indicateur au thymol et au bleu de bromothymol.
- A partir du thiosulfate, qui constitue une source de soufre, la production de sulfure
d’hydrogène est révélée en présence de citrate ferrique. Tous les Vibrio sont H2S-négatifs.
Matérielles et méthodes
23
L'incubation : se fait à 37° C et à température ambiante (25° C) pendant 48h.
La gélose King A
Principe :
La gélose King A permet la production de pyocyanine, pigment bleu sous lumière UV laquelle
est due spécifiquement à Pseudomonas aeruginosa. Elle est favorisée par la présence d'ions
inorganiques dans le milieu
La gélose King B
Principe :
La gélose King B permet la production de fluorescéine (ou pyoverdine), pigment jaune vert
fluorescent sous lumière ultra-violette, par certains Pseudomonas. La production de pyoverdine,
est favorisée par une teneur élevée en phosphate. Pseudomonas aeruginosa produit ce pigment
fluorescent contrairement à certaines espèces de Pseudomonas qui n’en produisent pas.
Lecture :
Les colonies de P. aeruginosa (commun aussi aux espèces du groupe P.fluorescens) sont plates,
à bord irrégulier et prenant un aspect irisé métallique avec le temps, elles présentent une
pigmentation caractéristique bleue ou bleu-vert et une fluorescence sous ultra-violets à 254 nm.
La lecture a été réalisée grâce à une table UV.
II.2.4.5. Recherche des Vibrio :
La gélose au Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose (TCBS) constitue un milieu sélectif destiné à
l’isolement de Vibrio cholerae et des autres vibrions entéropathogènes (en particulier Vibrio
parahaemolyticus) dans les poissons, les produits de la mer et les autres prélèvements
biologiques d’origine animale (Anonyme5).
Principe :
Les concentrations élevées en thiosulfate et en citrate de sodium ainsi que la forte alcalinité du
milieu inhibent fortement la croissance des entérobactéries.
- La bile de bœuf et le cholate de sodium ralentissent la culture des entérocoques et inhibent le
développement des germes à Gram positif.
- Par acidification du milieu, résultant de la fermentation du saccharose, les Vibrio provoquent
le virage au jaune de l’indicateur au thymol et au bleu de bromothymol.
- A partir du thiosulfate, qui constitue une source de soufre, la production de sulfure
d’hydrogène est révélée en présence de citrate ferrique. Tous les Vibrio sont H2S-négatifs.