CHAPITRE II : MATERIEL & METHODES
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II.2.4. Recherche et dénombrement des staphylocoques pathogènes à coagulase positive
Les staphylocoques constituent avec les microcoques les deux principaux genres de la famille des
Micrococcaceae. Ce sont des cocci à Gram positif, non sporulés, immobiles, se divisant en
plusieurs plans en formant des amas irréguliers. Ils produisent une catalase. Les staphylocoques à
coagulase positive (SCP), notamment Staphylococcus aureus, principal producteur
d’entérotoxines pathogènes pour l’homme, possède une enzyme, la coagulase qui permet de les
identifier (Guiraud et al, 2004).
Mode opératoire
Ensemencer en surface avec 0,1mL d’une dilution dans une boite de pétrie contenant déjà la gélose
Baird Parker ; le jaune d'œuf et tellurite de Potassium, étaler sur toute la surface à l'aide d'un râteau
puis incuber à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement
Les colonies de staphylococcus auréus donnent des colonies noires (réduction du tellurite en
tellure) avec un halo clair dû à la protéolyse des protéines du jaune d'œuf, et éventuellement, un
liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras produits par la lecithinase qui hydrolyse la
lécithine du jaune d'œuf). Leur taille est de 0,5 à 2mm, avec un aspect brillant.
Test de la coagulase
Prélever les colonies suspectées d'être celles des staphylococcus aureus qu'on ensemence
dans un tube contenant le milieu cœur cervelle, incubation à 37°C/24h.
Mettre dans une cloche de Durham 0,5 ml du milieu d'enrichissement + 0,5ml de plasma
de lapin, incuber à 37°C pendant 5 à 24h. La coagulation du plasma confirme que c'est le
germe staphylococcus aureus.
II.2.5. Recherche (présence/ absence) des Listeria
La Listeria monocytogenes est une bactérie de type Gram positif à l'origine de la listériose. Cette
maladie infectieuse et grave touche à la fois l'homme et les animaux. La listeria monocytogenes
constitue une bactérie très résistante qui peut se multiplier dans des atmosphères dont la
température est comprise entre 1°C et 45°C. Ces caractéristiques spécifiques expliquent le fait que
cette bactérie dispose d'une capacité de survie importante et peut proliférer dans un environnement
proche de celui de la réfrigération alimentaire. Elle peut donc être ingérée par l'intermédiaire de la
nourriture (Guiraud et al, 2004).
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II.2.4. Recherche et dénombrement des staphylocoques pathogènes à coagulase positive
Les staphylocoques constituent avec les microcoques les deux principaux genres de la famille des
Micrococcaceae. Ce sont des cocci à Gram positif, non sporulés, immobiles, se divisant en
plusieurs plans en formant des amas irréguliers. Ils produisent une catalase. Les staphylocoques à
coagulase positive (SCP), notamment Staphylococcus aureus, principal producteur
d’entérotoxines pathogènes pour l’homme, possède une enzyme, la coagulase qui permet de les
identifier (Guiraud et al, 2004).
Mode opératoire
Ensemencer en surface avec 0,1mL d’une dilution dans une boite de pétrie contenant déjà la gélose
Baird Parker ; le jaune d'œuf et tellurite de Potassium, étaler sur toute la surface à l'aide d'un râteau
puis incuber à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement
Les colonies de staphylococcus auréus donnent des colonies noires (réduction du tellurite en
tellure) avec un halo clair dû à la protéolyse des protéines du jaune d'œuf, et éventuellement, un
liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras produits par la lecithinase qui hydrolyse la
lécithine du jaune d'œuf). Leur taille est de 0,5 à 2mm, avec un aspect brillant.
Test de la coagulase
Prélever les colonies suspectées d'être celles des staphylococcus aureus qu'on ensemence
dans un tube contenant le milieu cœur cervelle, incubation à 37°C/24h.
Mettre dans une cloche de Durham 0,5 ml du milieu d'enrichissement + 0,5ml de plasma
de lapin, incuber à 37°C pendant 5 à 24h. La coagulation du plasma confirme que c'est le
germe staphylococcus aureus.
II.2.5. Recherche (présence/ absence) des Listeria
La Listeria monocytogenes est une bactérie de type Gram positif à l'origine de la listériose. Cette
maladie infectieuse et grave touche à la fois l'homme et les animaux. La listeria monocytogenes
constitue une bactérie très résistante qui peut se multiplier dans des atmosphères dont la
température est comprise entre 1°C et 45°C. Ces caractéristiques spécifiques expliquent le fait que
cette bactérie dispose d'une capacité de survie importante et peut proliférer dans un environnement
proche de celui de la réfrigération alimentaire. Elle peut donc être ingérée par l'intermédiaire de la
nourriture (Guiraud et al, 2004).