CHAPITRE II : MATERIEL & METHODES
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éme jour : Isolement
 Identifier 4 boites de Pétri : 2 boites contiennent le milieu Hektoen et les 2 autres
contiennent le milieu XLD ;
 Ensemencer en surface et à l’aide de l’anse de platine stérilisée, une goutte de bouillon
d’enrichissement RVS les deux boites identifiées : XLD ; Hektoen ;
 Puis, ensemencer de la même façon, une goutte de bouillon d’enrichissement Müller
Kaufmann les deux autres boites gélosées ;
 Incuber les à 37°C pendant 24h (Guiraud et al, 2004).
II.2.3. Recherche d’Escherichia coli
Les coliformes fécaux sont des micro-organismes indicateurs d'une pollution d'origine fécale
humaine ou animale. L'espèce caractéristique et principale des coliformes fécaux est E. coli
(Guiraud et al, 2004).
Mode opératoire
 L’ensemencement se fait en profondeur, à l’aide d’une pipette Pasteur, déposer stérilement
1 mL ou 20 gouttes de chaque dilution dans les boites de pétri, couler la gélose lactosée au
désoxycholate à 0,1 % puis procéder à l’étalement en faisant des mouvements en huit. Les
boites sont incubées à 44 °C pendant 24 h à 48 h.
 Retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre 30
et 300 colonies lenticulaires, fluorescentes sous lampe UV et de couleur rouge.
 Prendre de chaque boite au minimum 3 colonies jaunes suspectes et faire le test de l’uréeindole ;
 Première lecture de la première dilution retenue ;
b : nombre de colonies repiquées qui sont indole + et urée – ;
A : nombre de colonies repiquées (minimum 3) ;
C : nombre total de colonies par boite retenue.
 Première lecture de la deuxième dilution retenue ;
Le nombre de coliformes fécaux dont E.coli est donné par la formule suivante et exprimé en UFC/g
(yaourt) et UFC/ ml (lactosérum) :
a1=
b
A
xc
a2=
b
A
xc
CF(E. coli)=
a1+a2
𝟏, 𝟏. 𝒅
xc
d : dilution de la première boite retenue pour a1.