CHAPITRE II : MATERIEL & METHODES
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Tableau II.1 : Dénombrement de la FMAT du yaourt déclassé et du lactosérum.
Produit
Yaourt
Lactosérum
Milieu de culture
Gélose Plate Cunt Agar (PCA)
Protocole
1. Préparation des dilutions
 la dilution 10
-1 :
Diluer 1mL du yaourt dans 9 mL de
tryptone sel.
 La dilution 10
-2 :
Mettre 1mL de la solution 10
-1 dans 10mL
de tryptone sel.
 La dilution 10
-3 :
Mettre 1mL de la solution 10
-2 dans 10mL
de tryptone sel.
Préparation des dilutions
 la dilution 10
0 :
mettre 10 mL de la solution mère
dans un tube à essai
 La dilution 10
-1 :
Mettre 1mL de la solution 10
-0 dans
9mL de tryptone sel.
 La dilution 10
-2 :
Mettre 1mL de la solution 10
-1 dans
10 mL de tryptone sel.
2. Culture des bactéries
 Mettre 1mL de chaque dilution dans une boite de pétri ;
 Ajouter la gélose en surfusion, bien mélanger (échantillon et milieu).
3. Incubation : Les boites sont mises dans l’étuve à 30°C/72h.
4. Lecture
Dénombrer les colonies lenticulaires incluses dans la masse ; retenir les boites
donnant un dénombrement facile entre 30 et 300 colonies.
La formule mathématique suivante peut être utilisée :
N=  colonies/ v. (n1+n2).d1

N : Nombre d'UFC par gramme ou par mL de produit initial ;
  colonies : Somme des colonies des boites interprétables ;
 v : Volume de solution déposée (1mL) ;
 n1 : Nombre de boites considéré à la première dilution retenue ;
 n2 : Nombre de boite considéré à la seconde dilution retenue ;
 d1 : facteur de la première dilution retenue.

II.2.2. Recherche de Salmonelles
Mode opératoire
1
er jour : Pré-Enrichissement
 Préparation de la solution mère : peser 25g de l’échantillon dans un sac stérile puis ajouter
225g de l’eau peptonée tamponnée ;
 Agiter bien à l’aide d’un stomasher ;
 Ajouter des disques d’additifs SFB, Incuber à l’étuve à 37°C pendant 24h.
2
éme jour : Enrichissement
 D’une part, transférer 0,1 mL de SM pré-enrichie dans un tube contenant 10mL de bouillon
RVS, fermer et agiter puis incuber à l’étuve à 41,5°C pendant 24h ;
 D’autre part, mettre 1 mL de SM pré-enrichie dans un tube contenant 10mL de bouillon
Müller Kaufmann puis incuber à l’étuve à 37°C pendant 24h.