23
focalisation correcte des protéines. De la qualité de cette préparation de l’échantillon vont
dépendre les résultats de l’électrophorèse IEF et l’électrophorèse 2D (Ballihaut, 2007).
Electrophorèse de protéines sur gel de polyacrylamide en présence de
dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE)
C’est une technique très populaire de séparation des protéines, SDS-PAGE pour « Sodium
Dodecyl Sulfate - Poly Acrylamide Gel Electrophoresis » décrite initialement par Laemmli
en 1970 (175), et aujourd’hui très largement répandue (Ballihaut, 2007).
C’est une électrophorèse de zone des protéines dans un gel de polyacrylamide en conditions
dénaturantes. Les protéines extraites de l’organisme sont solubilisées, chargées négativement
par le SDS puis dénaturées (Ballihaut, 2007).
L’agent réducteur réduit les ponts disulfures des protéines ce qui a pour conséquence de les
dissocier en sous-unités polypeptidiques individuelles. Les protéines ainsi solubilisées
migrent dans un système d’électrophorèse discontinu constitué de deux gels de
polyacrylamide de porosité différente et tamponnés à des pH différents (Ballihaut, 2007).
Les protéines chargées négativement par le SDS possèdent une vitesse de migration
intermédiaire et vont de ce fait se trouver emprisonnées et donc concentrées dans la fine zone
délimitée par les ions Cl- et les ions glycine (Ballihaut, 2007)
Les protéines ainsi concentrées sont ensuite séparées suivant leur taille dans le gel de
séparation (running gel) (Ballihaut, 2007).
Les protéines ne sont plus emprisonnées dans la fine zone et sont alors séparées suivant leur
taille par migration vers l’électrode positive (Ballihaut, 2007).
Figure II.15 : Principe de l’électrophorèse monodimensionnelle sur gel de
polyacrylamide en conditions dénaturantes (1D-SDS-PAGE) (Ballihaut, 2007).