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Electrophorèse sur gel de polyacrylamide
Focalisation isoélectrique (IEF)
La focalisation isoélectrique (IEF) est une technique d’électrophorèse sur gel qui sépare les
protéines selon leurs points isoélectriques (pI) dans un gradient de pH. Le point isoélectrique
d’une protéine est le pH pour lequel la charge nette de la protéine est nulle (Ballihaut, 2007)
Les protéines, entraînées par un champ électrique, vont se déplacer dans ce gradient en
fonction de leur charge nette (Ballihaut, 2007)
Quand une protéine arrive au point de pH qui correspond à son point isoélectrique, sa charge
globale devient nulle résultant en un arrêt de sa migration, on parle de «focalisation
isoélectrique» (Figure 14) (Ballihaut, 2007)
Figure II.14: Principe de la focalisation isoélectrique des protéines (164).Après
application d’une tension, les protéines migrent dans le gradient de pH et se focalisent
au point de pH correspondant à leur pI (Ballihaut, 2007).
Ce mode de séparation utilise la charge des protéines ce qui proscrit l’utilisation des
détergents ioniques très efficaces comme le SDS pour la solubilisation des protéines
(Ballihaut, 2007).
Une haute qualité de préparation de l’échantillon est souvent nécessaire (Ballihaut, 2007).
Il est en effet important de se débarrasser des impuretés ioniques et des sels présents aux
côtés des protéines après la lyse cellulaire. Ces impuretés peuvent empêcher une focalisation
correcte des protéines, des précipitations TCA/acétone des protéines sont donc conseillées
pour les enlever. Les acides nucléiques, les lipides, les polysaccharides, les composés
phénoliques sont également des composés qui peuvent empêcher de différentes manières la
Electrophorèse sur gel de polyacrylamide
Focalisation isoélectrique (IEF)
La focalisation isoélectrique (IEF) est une technique d’électrophorèse sur gel qui sépare les
protéines selon leurs points isoélectriques (pI) dans un gradient de pH. Le point isoélectrique
d’une protéine est le pH pour lequel la charge nette de la protéine est nulle (Ballihaut, 2007)
Les protéines, entraînées par un champ électrique, vont se déplacer dans ce gradient en
fonction de leur charge nette (Ballihaut, 2007)
Quand une protéine arrive au point de pH qui correspond à son point isoélectrique, sa charge
globale devient nulle résultant en un arrêt de sa migration, on parle de «focalisation
isoélectrique» (Figure 14) (Ballihaut, 2007)
Figure II.14: Principe de la focalisation isoélectrique des protéines (164).Après
application d’une tension, les protéines migrent dans le gradient de pH et se focalisent
au point de pH correspondant à leur pI (Ballihaut, 2007).
Ce mode de séparation utilise la charge des protéines ce qui proscrit l’utilisation des
détergents ioniques très efficaces comme le SDS pour la solubilisation des protéines
(Ballihaut, 2007).
Une haute qualité de préparation de l’échantillon est souvent nécessaire (Ballihaut, 2007).
Il est en effet important de se débarrasser des impuretés ioniques et des sels présents aux
côtés des protéines après la lyse cellulaire. Ces impuretés peuvent empêcher une focalisation
correcte des protéines, des précipitations TCA/acétone des protéines sont donc conseillées
pour les enlever. Les acides nucléiques, les lipides, les polysaccharides, les composés
phénoliques sont également des composés qui peuvent empêcher de différentes manières la