| Matériel et Méthodes
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d. Analyse par spectrophotomètre
Une fois la centrifugation est achevée, transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve
de mesure en le prélevant par aspiration lente, en veillant à ne pas prendre les fibres avec,
puis, on mesure l’absorbance à 665 nm (longueur d’onde caractéristique de la chlorophylle) à
l’aide d’un spectrophotomètre de la marque JASCO V-730 (Fig.35).
Figure 21. Le spectrophotomètre JASCO V-730
L’absorbance mesurée par le spectrophotomètre est due à plusieurs composants : le solvant, la
chlorophylle, les phéopigments et les fibres du filtre, d’où la nécessité de corriger
l’absorbance par rapport à toutes ces interférences.
Pour estimer l’absorbance due à la turbidité, on passe le même échantillon au
spectrophotomètre mais à 750 nm (longueur d’onde à laquelle absorbent les fibres du filtre).
Les dérivés de la chlorophylle sont susceptibles d’induire une erreur énorme, car ils absorbent
presque à la même longueur d’onde caractéristique de la chlorophylle (~665nm) ; la solution
sera donc d’acidifier l’échantillon par quelques gouttes d’acide chlorhydrique (HCl 0.3N)
pendant 2 à 5 minutes pour décomposer la totalité des pigments chlorophylliens en
phéopigments. Ensuite, on mesure l’absorbance aux deux longueurs d’onde précédemment
décrites.
Mode opératoire
- Lancer le logiciel pour le spectrophotomètre JASCO V-730.
- Fixer les deux longueurs d’onde auxquelles on effectue la mesure 665 nm et 750 nm.
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d. Analyse par spectrophotomètre
Une fois la centrifugation est achevée, transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve
de mesure en le prélevant par aspiration lente, en veillant à ne pas prendre les fibres avec,
puis, on mesure l’absorbance à 665 nm (longueur d’onde caractéristique de la chlorophylle) à
l’aide d’un spectrophotomètre de la marque JASCO V-730 (Fig.35).
Figure 21. Le spectrophotomètre JASCO V-730
L’absorbance mesurée par le spectrophotomètre est due à plusieurs composants : le solvant, la
chlorophylle, les phéopigments et les fibres du filtre, d’où la nécessité de corriger
l’absorbance par rapport à toutes ces interférences.
Pour estimer l’absorbance due à la turbidité, on passe le même échantillon au
spectrophotomètre mais à 750 nm (longueur d’onde à laquelle absorbent les fibres du filtre).
Les dérivés de la chlorophylle sont susceptibles d’induire une erreur énorme, car ils absorbent
presque à la même longueur d’onde caractéristique de la chlorophylle (~665nm) ; la solution
sera donc d’acidifier l’échantillon par quelques gouttes d’acide chlorhydrique (HCl 0.3N)
pendant 2 à 5 minutes pour décomposer la totalité des pigments chlorophylliens en
phéopigments. Ensuite, on mesure l’absorbance aux deux longueurs d’onde précédemment
décrites.
Mode opératoire
- Lancer le logiciel pour le spectrophotomètre JASCO V-730.
- Fixer les deux longueurs d’onde auxquelles on effectue la mesure 665 nm et 750 nm.