| Matériel et Méthodes
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- Si une extraction immédiate n’est pas possible, envelopper le tube avec une feuille
d’aluminium pour le conserver au congélateur à -20°C.
b. L’extraction des pigments chlorophylliens
Pour l’extraction on utilise l’acétone comme un solvant d’extraction, le solvant recommandé
selon Aminot et al (1983). Ce dernier fait extraire et disperser les pigments chlorophylliens
des chloroplastes dans le milieu, ce qui facilite leur analyse ultérieurement, on procède
comme suit :
- Introduire le filtre plié dans le tube à centrifuger, ajouter 5 ml (±0.4) d’acétone (dans
un premier temps) pour éviter le débordement du solvant.
- Déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette en verre et bien agiter, ceci aide à
disperser les fibres dans le milieu.
- Rajouter les 5 ml (±0.4) restants du solvant, boucher le tube, pour éviter une
volatilisation éventuelle de l’acétone.
- Laisser agir une nuit au réfrigérateur.
c. Centrifugation
Le but de cette étape c’est de séparer la fraction lourde (fragments du filtre) de la fraction
légère (la chlorophylle ainsi que ses dérivés). A cette fin, on utilise une centrifugeuse de la
marque SIGMA 2-6 (Fig.34), ensuite, on récupère le surnageant à l’aide d’une micropipette.
Figure 20. La centrifugeuse SIGMA 2-6
- Placer les tubes dans la centrifugeuse, tout en gardant l’équilibre du rotor.
- Fixer la centrifugeuse à 3500 tour/minute et centrifuger pendant 5 minutes environ.
- Cinq minutes écoulées, retirer les tubes pour remettre en suspension les fibres
plaquées contre les parois des tubes.
- Refaire une deuxième centrifugation qui peut aller jusqu’à 10 à 15 minutes à la même
vitesse.
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- Si une extraction immédiate n’est pas possible, envelopper le tube avec une feuille
d’aluminium pour le conserver au congélateur à -20°C.
b. L’extraction des pigments chlorophylliens
Pour l’extraction on utilise l’acétone comme un solvant d’extraction, le solvant recommandé
selon Aminot et al (1983). Ce dernier fait extraire et disperser les pigments chlorophylliens
des chloroplastes dans le milieu, ce qui facilite leur analyse ultérieurement, on procède
comme suit :
- Introduire le filtre plié dans le tube à centrifuger, ajouter 5 ml (±0.4) d’acétone (dans
un premier temps) pour éviter le débordement du solvant.
- Déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette en verre et bien agiter, ceci aide à
disperser les fibres dans le milieu.
- Rajouter les 5 ml (±0.4) restants du solvant, boucher le tube, pour éviter une
volatilisation éventuelle de l’acétone.
- Laisser agir une nuit au réfrigérateur.
c. Centrifugation
Le but de cette étape c’est de séparer la fraction lourde (fragments du filtre) de la fraction
légère (la chlorophylle ainsi que ses dérivés). A cette fin, on utilise une centrifugeuse de la
marque SIGMA 2-6 (Fig.34), ensuite, on récupère le surnageant à l’aide d’une micropipette.
Figure 20. La centrifugeuse SIGMA 2-6
- Placer les tubes dans la centrifugeuse, tout en gardant l’équilibre du rotor.
- Fixer la centrifugeuse à 3500 tour/minute et centrifuger pendant 5 minutes environ.
- Cinq minutes écoulées, retirer les tubes pour remettre en suspension les fibres
plaquées contre les parois des tubes.
- Refaire une deuxième centrifugation qui peut aller jusqu’à 10 à 15 minutes à la même
vitesse.