| Matériel et Méthodes
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- Dans une cuve, verser 3 ml environ d’acétone, puis tarer l’appareil en appuyant sur
l’icône « Auto zéro », pour ne pas prendre en considération, lors de la mesure,
l’absorbance due au solvant ainsi de la cuve elle-même.
- Rincer la cuve une fois avec un peu de l'extrait à analyser.
- Transférer dans la cuve assez de volume pour faire la mesure.
- Vérifier la propreté des faces de la cuve et la positionner correctement sur le portoir.
- Mesurer les absorbances brutes de l'extrait non acidifié aux longueurs d'ondes de 665
et 750 nm, en appuyant sur l’icône « Sample ».
- Sortir la cuve et ajouter l'acide chlorhydrique 0,3 N à raison de 10 à 20 µl par millilitre
d'extrait.
- Laisser agir l'acide entre 2 et 5 min (mais pas plus).
- Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm.
- Rincer plusieurs fois la cuve au solvant pour éliminer toute trace d'acidité de
l'échantillon précédent, et faire la même chose pour les autres échantillons.
On aura donc :
Avant acidification : 𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝑁𝐴
= 𝐴𝑏𝑠 665 − 𝐴𝑏𝑠 750
(19)
Après acidification : 𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝐴
= 𝐴𝑏𝑠 665 − 𝐴𝑏𝑠 750
(20)
Après avoir corrigé l’absorbance, on peut déduire aisément la concentration de la chlorophylle
dans l’échantillon prélevé en appliquant la formule suivante :
[𝐶ℎ𝑙 𝑎 ](µí µí±” 𝑙
⁄ ) = 27.7 ∗ (𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝑁𝐴
− 𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝐴
) ∗
𝑣
𝑉 ∗ 𝑙
(21)
[Phéopigments 𝑎 ](µí µí±” 𝑙
⁄ ) = 27.7 ∗ [(1.7 ∗ 𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝐴
) − 𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝑁𝐴
) ∗
𝑣
𝑉 ∗ 𝑙
(22)
Avec :
V : volume d'eau filtrée (litre).
v : volume de solvant d'extraction (millilitre).
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (centimètre).
𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝑁𝐴
: absorbance de l’échantillon non acidifié à 665 nm.
𝐴𝑏𝑠 é𝑐ℎ−665
𝐴
: absorbance de l’échantillon acidifié à 665 nm.