Chapitre II
Matériel et Méthodes
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Mode opératoire pour l’analyse des coliformes totaux
 Test présomptif
Incuber :
- 03 tubes de 10ml BCPL, à double concentrations, avec 10ml de l’échantillon.
- 03 tubes de 10ml BCPL, à simple concentrations, avec 1ml de l’échantillon.
- 03 tubes de 10ml BCPL, à moins concentrations, avec 0.1ml de l’échantillon.
* Placer les tubes dans une étuve à37C°pendant24h à 48h.
* Procéder à une première lecture après cette incubation.
La lecture
Les tubes positifs sont ceux ou il se produit simultanément un trouble dans toute la masse
liquide (virage du bouillon au jaune) et un dégagement du gaz dans la cloche.
Pour la lecture, on se rapporte à la table de NPP (voir annexe 1) pour obtenir le nombre des
coliformes présent dans 100 ml de l’échantillon, et en notant le nombre des tubes positifs de
chaque série.
 Test confirmatif
Le but de ce test est de confirmer la présence des coliformes fécaux.
-A partir des tubes positifs de la première étape, on repique avec une anse bouclée ou une
pipette pasteur 2 à 3 gouttes dans le milieu Schubert muni d’une cloche de durham puis
incube à 44 C° pendant 24 heures.
Lecture :
Les tubes positifs sont ceux où apparait un dégagement d’un gaz dans la cloche Durham et un
anneau rouge en surface après addition d’1ml de réactif d’Ehrlich kovacs.
Expression des résultats :
Les résultats sont exprimés sous la forme suivante : le nombre le plus probable de coliformes
totaux, de coliformes fécaux ; Escherichia Coli présumés par 100 ml.