Mode opératoire :
La recherche des salmonella comporte plusieurs étapes :
- Pré enrichissement : ensemencement d'un milieu liquide non sélectif avec l’échantillon à
analyser, puis incubation à 37 °C ;
- Enrichissement : ensemencement de deux milieux liquides sélectifs à partir du bouillon de
pré enrichissement puis incubation à 37 °C ou 42-43 °C;
- Isolement : ensemencement de deux milieux sélectifs solides à partir des bouillons
d'enrichissement puis incubation à 37 °C;
- Identification : des colonies présumées à l'aide de tests biochimiques ou sérologiques.
Tout type de colonies dont l’aspect est caractéristique ou douteux doit être soumis à une
confirmation.
Incubation du milieu TSI
Choisir les colonies typique ou suspectes sur la gélose d’isolement : repiquer environ cinq
colonies de chaque type de sur milieu TSI. Ce milieu permet de vérifier la pureté des colonies
et de fournir les quantités de culture nécessaire pour l’identification biochimique ou
sérologique.
Ensemencer le milieu de TSI par piqures du culot et par stricts longitudinales sur la pente.
Incuber à 37C° pendant 24heures.
Le culot de milieu de TSI doit alors être jaune (fermentation du lactose, du saccharose ou des
deux) et la pente rouge (absence de fermentation du lactose ou saccharose) les salmonelles
n’attaquent aucun de ces sucres donc la coloration reste rouge.
Par contre les Porteuses, qui les pus souvent utilisent le saccharose, donneront en générale une
pente de coloration jaune.
Identification biochimique
Trois ou quatre colonies suspectes par boites de HEKTOEN sont repiquées sur gélose triple
sucre fer (TSI).
-Incuber 18heures à 37C° ;
-Identification des entérobactéries sur TSI ;
-Culot de glucose fermentation négative ; absence d’entérobactéries ;
Dans ce dernier cas, faire la réaction à l’oxydase ; elle est négative pour les entérobactéries.
Sur TSI, les salmonelles présentent l’aspect suivant :
Tableau I : Caractéristiques des Salmonelles.