*Incuber :
-3 tubes de 10ml BCPL, à double concentrations, avec 10ml de l’échantillon.
-3 tubes de 10ml BCPL, à simple concentrations, avec 1ml de l’échantillon.
-3 tubes de 10ml BCPL, à moins concentrations, avec 0.1ml de l’échantillon.
*Placer les tubes dans une étuve à37C°pendant24h à 48h.
*Procéder à une première lecture après cette incubation.
La lecture
Les tubes positifs sont ceux ou il se produit simultanément un trouble dans toute la masse liquide
(virage du bouillon au jaune) et un dégagement du gaz dans la cloche.
Pour la lecture, on se rapporte à la table de NPP pour obtenir le nombre des coliformes présent
dans 100ml de l’échantillon, et en notant le nombre des tubes positifs de chaque série.
2-Les coliformes fécaux ; Identification présomptive Escherichia Coli :
A partir des tubes positifs de la première étape, on repique avec une ance bouclée ou une pipette
pasteur 2 à 3 gouttes dans le milieu indole-mannitol(Schubert) muni d’une cloche de durham
puis incube à 44C° pendant24heures.
Lecture :
Les tubes positifs sont ceux ou apparait un dégagement d’un gaz dans la cloche Durham et un
anneau rouge en surface après addition d’1ml de réactif d’Ehrlich kovacs.
Expression des résultats :
Les résultats sont exprimés sous la forme suivante : le nombre le plus probable de coliformes
totaux de coliformes fécaux ; Escherichia Coli présumés par 100ml.
3-Dénombrement des streptocoques fécaux
Les streptocoques fécaux possèdent la substance antigénique caractéristique du groupe D de
lancefield c'est-à-dire : streptococcus faecium, streptococcus durans, streptococcus bovis,
streptococcus equinis .Ces streptococcus du groupe D sont généralement prés globalement, on
compte comme des témoins de pollution fécale.
Lorsque le rapport coliformes fécaux/ streptocoques fécaux est supérieur à quatre, la pollution
est d’origine humaine (égouts urbains).
Principe
Après l’ensemencement dans des séries de tubes contenant une certaine quantité d’acide de
sodium, le repiquage des tubes positifs sur un milieu nettement plus inhibiteur (forte
concentration en acide de sodium et d’éthyle violet) laisse que les streptocoques fécaux se
développent.
Mode opératoire
-3 tubes de 10ml BCPL, à double concentrations, avec 10ml de l’échantillon.
-3 tubes de 10ml BCPL, à simple concentrations, avec 1ml de l’échantillon.
-3 tubes de 10ml BCPL, à moins concentrations, avec 0.1ml de l’échantillon.
*Placer les tubes dans une étuve à37C°pendant24h à 48h.
*Procéder à une première lecture après cette incubation.
La lecture
Les tubes positifs sont ceux ou il se produit simultanément un trouble dans toute la masse liquide
(virage du bouillon au jaune) et un dégagement du gaz dans la cloche.
Pour la lecture, on se rapporte à la table de NPP pour obtenir le nombre des coliformes présent
dans 100ml de l’échantillon, et en notant le nombre des tubes positifs de chaque série.
2-Les coliformes fécaux ; Identification présomptive Escherichia Coli :
A partir des tubes positifs de la première étape, on repique avec une ance bouclée ou une pipette
pasteur 2 à 3 gouttes dans le milieu indole-mannitol(Schubert) muni d’une cloche de durham
puis incube à 44C° pendant24heures.
Lecture :
Les tubes positifs sont ceux ou apparait un dégagement d’un gaz dans la cloche Durham et un
anneau rouge en surface après addition d’1ml de réactif d’Ehrlich kovacs.
Expression des résultats :
Les résultats sont exprimés sous la forme suivante : le nombre le plus probable de coliformes
totaux de coliformes fécaux ; Escherichia Coli présumés par 100ml.
3-Dénombrement des streptocoques fécaux
Les streptocoques fécaux possèdent la substance antigénique caractéristique du groupe D de
lancefield c'est-à-dire : streptococcus faecium, streptococcus durans, streptococcus bovis,
streptococcus equinis .Ces streptococcus du groupe D sont généralement prés globalement, on
compte comme des témoins de pollution fécale.
Lorsque le rapport coliformes fécaux/ streptocoques fécaux est supérieur à quatre, la pollution
est d’origine humaine (égouts urbains).
Principe
Après l’ensemencement dans des séries de tubes contenant une certaine quantité d’acide de
sodium, le repiquage des tubes positifs sur un milieu nettement plus inhibiteur (forte
concentration en acide de sodium et d’éthyle violet) laisse que les streptocoques fécaux se
développent.
Mode opératoire