1-Préparation des dilutions
Pour la dilution, il pourra être utilisé soit dans l’eau distillée ; il est procéder le plus souvent à
des séries de dilution forant une progression géométrique de (0,1-0,01-0,001 …) par addition de
10ml. L’échantillon a un flacon contenant 90ml d’eau distillée stérile.
Il est nécessaire d’agiter, énergiquement et longtemps chaque échantillon avant de le diluer et
chaque dilution avant de préparer à partir d’elle la dilution suivante ; cette agitation est
nécessaire lorsque les eaux sont chargées par la matière en suspension.
2-La recherche et dénombrement des germes
2-1-Méthode de dénombrement par inoculation en milieu liquide(NPP) « Nombre le plus
probable »
Principe
L’ensemencement dans des tubes de milieux de culture liquide de plusieurs séries de prises
d’essai ,puis détermination d’après le nombre de tube positif dans chaque série du domaine
d’application :cette méthode est surtout intéressante pour les eaux dont la matière non soluble
fait obstacle à l’utilisation de la filtration sur membrane.
Elle est très facile, adaptable aux divers but vasés par les analyses, par la variété des choix
possible dans des prises d’essai. Elle est onéreuse et surtout ne permet d’obtenir des résultats
qu’avec des intervalles de confiance très large, souvent inacceptable.
-Dénombrement des coliformes totaux et coliformes fécaux
Sous le terme de coliforme est regroupé un certain nombre d’espèces bactérienne appartenant à
la famille des Enterobacteriaceae et dont la caractéristique classique et la fermentation du lactose
avec production du gaz.
La présence des coliformes dans l’eau est la preuve que cette eau à subi une contamination par
des matières fécales.
Le dénombrement de ces microorganismes est à 35-37°C.
Le terme de coliformes fécaux correspond à des coliformes qui présentent les mêmes propriétés
des coliformes après incubation à la température de 44°C.
Principe
Après l’ensemencement dans des séries de tubes contenant un milieu d’inoculation non
véritablement sélective mais permettant de mettre en évidence la fermentation du lactose avec
production du gaz, incuber soit à 37°C soit à 44°C pour les dénombrement des coliformes totaux
ou de coliformes fécaux et en outre sur un milieu indole-mannitol(le milieu de Schubert)muni
d’une cloche de durhan pour mettre en évidence la production d’indole à 44°C par les
Escherichia Coli présumés.
Mode opératoire
1-Les coliformes totaux :
Il est impératif de traiter 100ml de l’échantillon. Pour cela on choisit d’ensemencer ces derniers
en milieu liquide.
Pour la dilution, il pourra être utilisé soit dans l’eau distillée ; il est procéder le plus souvent à
des séries de dilution forant une progression géométrique de (0,1-0,01-0,001 …) par addition de
10ml. L’échantillon a un flacon contenant 90ml d’eau distillée stérile.
Il est nécessaire d’agiter, énergiquement et longtemps chaque échantillon avant de le diluer et
chaque dilution avant de préparer à partir d’elle la dilution suivante ; cette agitation est
nécessaire lorsque les eaux sont chargées par la matière en suspension.
2-La recherche et dénombrement des germes
2-1-Méthode de dénombrement par inoculation en milieu liquide(NPP) « Nombre le plus
probable »
Principe
L’ensemencement dans des tubes de milieux de culture liquide de plusieurs séries de prises
d’essai ,puis détermination d’après le nombre de tube positif dans chaque série du domaine
d’application :cette méthode est surtout intéressante pour les eaux dont la matière non soluble
fait obstacle à l’utilisation de la filtration sur membrane.
Elle est très facile, adaptable aux divers but vasés par les analyses, par la variété des choix
possible dans des prises d’essai. Elle est onéreuse et surtout ne permet d’obtenir des résultats
qu’avec des intervalles de confiance très large, souvent inacceptable.
-Dénombrement des coliformes totaux et coliformes fécaux
Sous le terme de coliforme est regroupé un certain nombre d’espèces bactérienne appartenant à
la famille des Enterobacteriaceae et dont la caractéristique classique et la fermentation du lactose
avec production du gaz.
La présence des coliformes dans l’eau est la preuve que cette eau à subi une contamination par
des matières fécales.
Le dénombrement de ces microorganismes est à 35-37°C.
Le terme de coliformes fécaux correspond à des coliformes qui présentent les mêmes propriétés
des coliformes après incubation à la température de 44°C.
Principe
Après l’ensemencement dans des séries de tubes contenant un milieu d’inoculation non
véritablement sélective mais permettant de mettre en évidence la fermentation du lactose avec
production du gaz, incuber soit à 37°C soit à 44°C pour les dénombrement des coliformes totaux
ou de coliformes fécaux et en outre sur un milieu indole-mannitol(le milieu de Schubert)muni
d’une cloche de durhan pour mettre en évidence la production d’indole à 44°C par les
Escherichia Coli présumés.
Mode opératoire
1-Les coliformes totaux :
Il est impératif de traiter 100ml de l’échantillon. Pour cela on choisit d’ensemencer ces derniers
en milieu liquide.