Chapitre I
Généralités
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3.7. Extraction des polysaccharides
Le tissu de notre échantillon est broyé et dissout dans de l’acétate de sodium, l’EDTA, la
cystéine et l’alcalase pendant 24h à 50°C. Plus tard, le mélange est refroidi à température
ambiante et filtré. Après, les résidus sont rincés à l’eau distillée et filtrés pour une deuxième
fois. Les polysaccharides sont précipités avec du chlorure de cétylpyridinium pendant 24h à
température ambiante, ensuite ils sont centrifugés pendant 30 mn à 5000 tr/ mn à 4°C. Le culot
est dissout dans du chlorure de sodium NaCl et de l’éthanol, ensuite 700 ml d’éthanol sont
ajoutés, le mélange y reste pendant 24h à 4°C. Ensuite, la solution est centrifugée pendant 30
mn à 5000 tr /mn à 4°C. Le culot est rincé deux fois avec de l’éthanol à 80% et une fois avec
de l’éthanol pur, ensuite il est dissout dans de l’eau distillée et est lyophilisé. Celui-ci représente
la fraction de polysaccharide isolée (Abdelmalek et al. 2015).
3.8. Purification des lipides totaux
La technique utilisée, pour l’extraction des lipides, est la méthode de Folch et al. (1957),
les tissus sont homogénéisés avec un homogénéisateur manuel ou électrique dans un total de
10ml chloroforme—méthanol ensuite 400 µl de tricosanoate de méthyle (0.5mg/ml) sont
ajoutés à l’échantillon (solution étalon interne pour la quantification sur chromatographie en
phase gazeuse). L’échantillon est laissé pendant une nuit à 10°C sous azote pour favoriser
l’extraction des lipides tout en minimisant les oxydations. Le contenant est rincé avec de
l’acétone puis filtré ; 2.5ml de NaCl à 0.88% sont ajoutés, après la séparation des couches, la
couche lipidique est séchée à sec sous azote dans un tube d’ébullition à 35°C. Le screening des
lipides se fait sur chromatographie en phase gazeuse (Cook et al. 2000).
3.8.1. Principe de la chromatographie en phase gazeuse
L’échantillon circule dans une colonne, entrainé par un gaz vecteur inerte, ce dernier est en
contact avec la phase stationnaire qui se trouve sur la paroi interne de la colonne. Par suite du
phénomène d’adsorption, les constituants du mélange sont retenus par la phase stationnaire
selon leur affinité avec celle-ci (Bassez [sans date]).
4. Impacts de la biotechnologie marine sur l’environnement
4.1. Bienfaits de la biotechnologie sur l’environnement
Le biofouling est un problème majeur pour les navires de transport ainsi que pour les filets
et cordes des fermes aquacoles. L’encrassement des micro et macro organismes cause leur
Généralités
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3.7. Extraction des polysaccharides
Le tissu de notre échantillon est broyé et dissout dans de l’acétate de sodium, l’EDTA, la
cystéine et l’alcalase pendant 24h à 50°C. Plus tard, le mélange est refroidi à température
ambiante et filtré. Après, les résidus sont rincés à l’eau distillée et filtrés pour une deuxième
fois. Les polysaccharides sont précipités avec du chlorure de cétylpyridinium pendant 24h à
température ambiante, ensuite ils sont centrifugés pendant 30 mn à 5000 tr/ mn à 4°C. Le culot
est dissout dans du chlorure de sodium NaCl et de l’éthanol, ensuite 700 ml d’éthanol sont
ajoutés, le mélange y reste pendant 24h à 4°C. Ensuite, la solution est centrifugée pendant 30
mn à 5000 tr /mn à 4°C. Le culot est rincé deux fois avec de l’éthanol à 80% et une fois avec
de l’éthanol pur, ensuite il est dissout dans de l’eau distillée et est lyophilisé. Celui-ci représente
la fraction de polysaccharide isolée (Abdelmalek et al. 2015).
3.8. Purification des lipides totaux
La technique utilisée, pour l’extraction des lipides, est la méthode de Folch et al. (1957),
les tissus sont homogénéisés avec un homogénéisateur manuel ou électrique dans un total de
10ml chloroforme—méthanol ensuite 400 µl de tricosanoate de méthyle (0.5mg/ml) sont
ajoutés à l’échantillon (solution étalon interne pour la quantification sur chromatographie en
phase gazeuse). L’échantillon est laissé pendant une nuit à 10°C sous azote pour favoriser
l’extraction des lipides tout en minimisant les oxydations. Le contenant est rincé avec de
l’acétone puis filtré ; 2.5ml de NaCl à 0.88% sont ajoutés, après la séparation des couches, la
couche lipidique est séchée à sec sous azote dans un tube d’ébullition à 35°C. Le screening des
lipides se fait sur chromatographie en phase gazeuse (Cook et al. 2000).
3.8.1. Principe de la chromatographie en phase gazeuse
L’échantillon circule dans une colonne, entrainé par un gaz vecteur inerte, ce dernier est en
contact avec la phase stationnaire qui se trouve sur la paroi interne de la colonne. Par suite du
phénomène d’adsorption, les constituants du mélange sont retenus par la phase stationnaire
selon leur affinité avec celle-ci (Bassez [sans date]).
4. Impacts de la biotechnologie marine sur l’environnement
4.1. Bienfaits de la biotechnologie sur l’environnement
Le biofouling est un problème majeur pour les navires de transport ainsi que pour les filets
et cordes des fermes aquacoles. L’encrassement des micro et macro organismes cause leur