Chapitre I
Généralités
25
- Distillation de l’ammoniac par vapeur d’eau et le piéger dans de l’acide borique pour
former des sels de borates d’ammonium.
- Titrage de l’ammoniac sous forme de sel à l’aide d’acide standardisé (Wrolstad et al.
2005).
3.4. Purification des lectines
L’extraction des lectines s’effectue par l’homogénéisation des tissus de l’échantillon avec
le PBS (Tampon Phosphate Salin) pour une extraction tampon, l’homogénat est agité à 4°C
pendant une nuit et centrifugé pendant 30 mn à 4000tr/mn. Le surnageant, qui est notre extrait
brut est utilisé pour l’identification des lectines par chromatographie d’échange ionique
(Molchanova et al. 2007).
3.4.1. Principe de la chromatographie ionique
La chromatographie ionique se base sur le principe de séparer les ions trouvés dans la phase
mobile et la phase stationnaire. La séparation des anions se fait avec une colonne d’échange
anioniques et les cations avec une colonne d’échanges cationiques (BEI ERE, 2010).
3.5. Extraction des sels minéraux
Les sels minéraux sont analysés par la combustion des produits biologiques dans un four à
moufle à 550°C pendant 5h (Yu et al. 2015).
3.6. Extraction des caroténoïdes
L’extraction des pigments, à partir des tissus, s’effectue dans le noir à 15-20°C en
conservant les tissus dans de l’acétone à 90% pendant une nuit. Après refroidissement, la
suspension est centrifugée à 1500 tr/mn pendant 10-15 mn. Le surnageant est filtré, puis séché
dans un évaporateur rotatif à une température qui ne dépasse pas 25°C. L’échantillon est stocké
dans des ampoules fermées et placé dans un sac noir. Il est par la suite dissout dans du
chloroforme, et enfin les pigments sont purifiés par chromatographie sur couche mince.
(Borodina, Maoka, Soldatov 2013)
3.6.1. Principe de la chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince repose sur le principe de séparer les molécules en
fonction de leur affinité avec la phase stationnaire (couche mince) et avec la phase mobile
(l’éluant). Cette dernière se déplace par capillarité à travers la phase stationnaire, en entrainant
à des distances et vitesses différentes les constituants à séparer (Hammouboutrig, 2019).
Généralités
25
- Distillation de l’ammoniac par vapeur d’eau et le piéger dans de l’acide borique pour
former des sels de borates d’ammonium.
- Titrage de l’ammoniac sous forme de sel à l’aide d’acide standardisé (Wrolstad et al.
2005).
3.4. Purification des lectines
L’extraction des lectines s’effectue par l’homogénéisation des tissus de l’échantillon avec
le PBS (Tampon Phosphate Salin) pour une extraction tampon, l’homogénat est agité à 4°C
pendant une nuit et centrifugé pendant 30 mn à 4000tr/mn. Le surnageant, qui est notre extrait
brut est utilisé pour l’identification des lectines par chromatographie d’échange ionique
(Molchanova et al. 2007).
3.4.1. Principe de la chromatographie ionique
La chromatographie ionique se base sur le principe de séparer les ions trouvés dans la phase
mobile et la phase stationnaire. La séparation des anions se fait avec une colonne d’échange
anioniques et les cations avec une colonne d’échanges cationiques (BEI ERE, 2010).
3.5. Extraction des sels minéraux
Les sels minéraux sont analysés par la combustion des produits biologiques dans un four à
moufle à 550°C pendant 5h (Yu et al. 2015).
3.6. Extraction des caroténoïdes
L’extraction des pigments, à partir des tissus, s’effectue dans le noir à 15-20°C en
conservant les tissus dans de l’acétone à 90% pendant une nuit. Après refroidissement, la
suspension est centrifugée à 1500 tr/mn pendant 10-15 mn. Le surnageant est filtré, puis séché
dans un évaporateur rotatif à une température qui ne dépasse pas 25°C. L’échantillon est stocké
dans des ampoules fermées et placé dans un sac noir. Il est par la suite dissout dans du
chloroforme, et enfin les pigments sont purifiés par chromatographie sur couche mince.
(Borodina, Maoka, Soldatov 2013)
3.6.1. Principe de la chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince repose sur le principe de séparer les molécules en
fonction de leur affinité avec la phase stationnaire (couche mince) et avec la phase mobile
(l’éluant). Cette dernière se déplace par capillarité à travers la phase stationnaire, en entrainant
à des distances et vitesses différentes les constituants à séparer (Hammouboutrig, 2019).