Matériel et méthodes
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Principe
L‟extraction de la phycocyanine par la méthode de séparation à double phase implique la
séparation des molécules entre deux ou plusieurs phases aqueuses immiscibles. Du polyéthylène
glycol (PEG) et des sels phosphate sont ajoutés à une quantité donnée d'extrait frais de
phycocyanine. Après mélange et décantation, le système se sépare en deux phases. Ces phases sont
ensuite analysées par spectroscopie UV pour estimer la pureté et la quantité de la phycocyanine.
Mode opératoire
- On met une solution de spiruline à l‟obscurité (90g de spiruline dans 10 ml d‟eau) à laquelle on
rajoute une solution de 40% de polyéthylène glycol (40 g dans 60 ml d‟eau) et une solution de 20%
de sels de phosphates (10 g de K2HPO4 et 10 g de KH2 PO4 dans 60 ml d‟eau) (on a utilisé une
solution glucosée : 20 g de glucose dans 80 ml d‟eau). (Voir annexe figure 7).
- Avec la méthode d‟Alberston, on a prélevé 1g de 40 % (1/1) de PEG, 1,25 g de 20 % (1/1) de
sels phosphates + 0.5 g de spiruline et 2.25 ml d‟eau.
-Après mélange, le composé est mis à l‟obscurité dans un agitateur pendant 20 minutes. On
procède à une centrifugation, puis à la mesure des volumes de phases et on lit l‟absorbance à 280
nm, à 615 nm, à 620 nm et à 652 nm.
Une solution de spiruline de 90 % (90 g de spiruline dans 10g ml d‟eau) à l‟obscurité est préparée.
Rajouter :
Une solution de 40% de polyéthylène glycol (PEG) : 40 g PEG dans 60 g d‟eau
Une solution de sels de phosphates à 20% : mélange de 10 g de K 2 HPO 4 et 10 g de KH 2 PO 4 dans 60
g d‟eau (on a utilisé une solution glucosée à 20% : 20 g de glucose dans 80 ml d‟eau).
Calcul du pourcentage et la pureté en phycocyanine
Après mélange, le composé mis à l‟obscurité, subit une agitation
Avec la méthode d‟Alberston, prélever 1g de 40 % (1/1) de PEG, 1,25 g de 20 % (1/1) de sels
phosphates + 0.5 g de spiruline et 2.25 ml d‟eau.
Figure 12 : Extraction de la phycocyanine par séparation aqueuse à double phase
ine par séparation aqueuse à double phase
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Principe
L‟extraction de la phycocyanine par la méthode de séparation à double phase implique la
séparation des molécules entre deux ou plusieurs phases aqueuses immiscibles. Du polyéthylène
glycol (PEG) et des sels phosphate sont ajoutés à une quantité donnée d'extrait frais de
phycocyanine. Après mélange et décantation, le système se sépare en deux phases. Ces phases sont
ensuite analysées par spectroscopie UV pour estimer la pureté et la quantité de la phycocyanine.
Mode opératoire
- On met une solution de spiruline à l‟obscurité (90g de spiruline dans 10 ml d‟eau) à laquelle on
rajoute une solution de 40% de polyéthylène glycol (40 g dans 60 ml d‟eau) et une solution de 20%
de sels de phosphates (10 g de K2HPO4 et 10 g de KH2 PO4 dans 60 ml d‟eau) (on a utilisé une
solution glucosée : 20 g de glucose dans 80 ml d‟eau). (Voir annexe figure 7).
- Avec la méthode d‟Alberston, on a prélevé 1g de 40 % (1/1) de PEG, 1,25 g de 20 % (1/1) de
sels phosphates + 0.5 g de spiruline et 2.25 ml d‟eau.
-Après mélange, le composé est mis à l‟obscurité dans un agitateur pendant 20 minutes. On
procède à une centrifugation, puis à la mesure des volumes de phases et on lit l‟absorbance à 280
nm, à 615 nm, à 620 nm et à 652 nm.
Une solution de spiruline de 90 % (90 g de spiruline dans 10g ml d‟eau) à l‟obscurité est préparée.
Rajouter :
Une solution de 40% de polyéthylène glycol (PEG) : 40 g PEG dans 60 g d‟eau
Une solution de sels de phosphates à 20% : mélange de 10 g de K 2 HPO 4 et 10 g de KH 2 PO 4 dans 60
g d‟eau (on a utilisé une solution glucosée à 20% : 20 g de glucose dans 80 ml d‟eau).
Calcul du pourcentage et la pureté en phycocyanine
Après mélange, le composé mis à l‟obscurité, subit une agitation
Avec la méthode d‟Alberston, prélever 1g de 40 % (1/1) de PEG, 1,25 g de 20 % (1/1) de sels
phosphates + 0.5 g de spiruline et 2.25 ml d‟eau.
Figure 12 : Extraction de la phycocyanine par séparation aqueuse à double phase
ine par séparation aqueuse à double phase