Matériel et méthodes
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Tel que :
N : Nombre de colonies par ml.
C : Nombre de colonies des boites retenues.
V : Volume de l’inoculum (0.1 ml)
d : Dilution de la 1
ère boite retenue.
3.3.6. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réductrices
➢ Principe :
Les Clostridium sulfito-réductrices sont des bacilles, Gram positif, catalase négative,
anaérobies stricts, ils se multiplient facilement sur les milieux ordinaires, ils sont capables de
sporuler, la forme et la position de la spore ont une importance taxonomique (GUIRAUD &
ROSEC, 2004).
➢ Mode opératoire :
La recherche des Clostridium sulfito-réductrices est effectuée sur des milieux contenant du
sulfite de sodium et de l’alun de fer, les Clostridium peuvent réduire le sulfite de sodium et
donner en présence de fer du sulfure d’où une coloration noire des colonies. Avant l’utilisation
du milieu VF 0,5ml du sulfite de sodium et quelques gouttes d’alun de fer sont ajoutés dans
un flacon contenant la gélose de VF fondue et homogénéisée par agitation.
- Ajouter 5 ml de la suspension mère de chaque échantillon dans des tubes vides
stériles. mettre les tubes dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 minutes afin
d’assurer la destruction des formes végétatives.
- Refroidir rapidement sous le robinet (choc thermique).
- Aseptiquement, Verser environ 20ml de gélose VF dans les deux tubes qui
contiennent 5 ml de chaque échantillon pour créer l’anaérobiose.
- homogénéiser l’ensemble par un mouvement rotatoire vertical, en évitant toute
introduction d’air.
- Incuber à 37°C pendant 24 heures.
➢ Lecture : Les Clostridium sulfito-réductrices apparaissent sous forme de colonies
noires. La première lecture doit se faire impérativement à 16 heures, car les colonies de
Clostridium sulfito-réductrices sont envahissantes et on pourrait se trouver en face d’un
tube noir dont l’interprétation devient impossible. Il faut repérer toute colonie noire d’un
diamètre supérieur à 0,5mm ainsi que compter les tubes positifs et calculer NPP.
3.3.7. Recherche et dénombrement des Salmonelles
➢ Principe :
Les salmonelles sont des bacilles à Gram négatif, mobiles, aéro-anaérobies facultatifs,
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Tel que :
N : Nombre de colonies par ml.
C : Nombre de colonies des boites retenues.
V : Volume de l’inoculum (0.1 ml)
d : Dilution de la 1
ère boite retenue.
3.3.6. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réductrices
➢ Principe :
Les Clostridium sulfito-réductrices sont des bacilles, Gram positif, catalase négative,
anaérobies stricts, ils se multiplient facilement sur les milieux ordinaires, ils sont capables de
sporuler, la forme et la position de la spore ont une importance taxonomique (GUIRAUD &
ROSEC, 2004).
➢ Mode opératoire :
La recherche des Clostridium sulfito-réductrices est effectuée sur des milieux contenant du
sulfite de sodium et de l’alun de fer, les Clostridium peuvent réduire le sulfite de sodium et
donner en présence de fer du sulfure d’où une coloration noire des colonies. Avant l’utilisation
du milieu VF 0,5ml du sulfite de sodium et quelques gouttes d’alun de fer sont ajoutés dans
un flacon contenant la gélose de VF fondue et homogénéisée par agitation.
- Ajouter 5 ml de la suspension mère de chaque échantillon dans des tubes vides
stériles. mettre les tubes dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 minutes afin
d’assurer la destruction des formes végétatives.
- Refroidir rapidement sous le robinet (choc thermique).
- Aseptiquement, Verser environ 20ml de gélose VF dans les deux tubes qui
contiennent 5 ml de chaque échantillon pour créer l’anaérobiose.
- homogénéiser l’ensemble par un mouvement rotatoire vertical, en évitant toute
introduction d’air.
- Incuber à 37°C pendant 24 heures.
➢ Lecture : Les Clostridium sulfito-réductrices apparaissent sous forme de colonies
noires. La première lecture doit se faire impérativement à 16 heures, car les colonies de
Clostridium sulfito-réductrices sont envahissantes et on pourrait se trouver en face d’un
tube noir dont l’interprétation devient impossible. Il faut repérer toute colonie noire d’un
diamètre supérieur à 0,5mm ainsi que compter les tubes positifs et calculer NPP.
3.3.7. Recherche et dénombrement des Salmonelles
➢ Principe :
Les salmonelles sont des bacilles à Gram négatif, mobiles, aéro-anaérobies facultatifs,