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L’effet global est que dans chacune des quatre préparations, est produite une série de
molécules de l’ADN de différentes longueurs qui se terminent en une position où dans la
matrice est présenté la base complémentaire de celle dont la forme dd est présenté dans le
milieu réactionnel considéré.
Par exemple, dans la préparation contenant du ddATP, est produite une série de molécules
d’ADN qui se terminent toutes par un A correspondant à un T dans la matrice.
A l’issue de la réaction de séquençage, les molécules d’ADN synthétisées sont séparées
suivant leurs tailles par électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec les 4 préparations
versées sur 4 lignes parallèles du gel. Si on ajoute des dNTP contenant du phosphore ou du
souffre radioactif dans les préparations de séquençage, les ADN synthétisés deviennent
radioactifs, ce qui permet de les détecter en plaçant le gel de polyacrylamide contre une
feuille de film sensible aux rayons X. Ceci s’appelle de l’autoradiographie.
C’est plutôt dans le cas de southern blot Lorsqu’on développe le film, on peut observer une
série de bandes dans chacune des lignes de gel. La séquence de l’ADN matrice peut alors être
déterminée en identifiant les plus petites bandes et les bandes de plus en plus grosses et en
associant la ligne dans le gel à la base terminale.
Figure II.34 : Séquençage de l’ADN (Gilles Furelaud 2014)
Il ne reste plus qu'à "lire" la séquence: on fait migrer tous ces fragments sur un gel afin de les
séparer selon leur taille. Au niveau d'une "ligne" du gel correspond une taille (précise au
nucléotide près) du fragment d'ADN. Afin de lire les quatre nucléotides de l'ADN, on fait
migrer séparément les fragments issus des quatre mélanges réactionnels (à ddATP, à ddCTP,
à ddGTP et à ddTTP) (figure 35).
L’effet global est que dans chacune des quatre préparations, est produite une série de
molécules de l’ADN de différentes longueurs qui se terminent en une position où dans la
matrice est présenté la base complémentaire de celle dont la forme dd est présenté dans le
milieu réactionnel considéré.
Par exemple, dans la préparation contenant du ddATP, est produite une série de molécules
d’ADN qui se terminent toutes par un A correspondant à un T dans la matrice.
A l’issue de la réaction de séquençage, les molécules d’ADN synthétisées sont séparées
suivant leurs tailles par électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec les 4 préparations
versées sur 4 lignes parallèles du gel. Si on ajoute des dNTP contenant du phosphore ou du
souffre radioactif dans les préparations de séquençage, les ADN synthétisés deviennent
radioactifs, ce qui permet de les détecter en plaçant le gel de polyacrylamide contre une
feuille de film sensible aux rayons X. Ceci s’appelle de l’autoradiographie.
C’est plutôt dans le cas de southern blot Lorsqu’on développe le film, on peut observer une
série de bandes dans chacune des lignes de gel. La séquence de l’ADN matrice peut alors être
déterminée en identifiant les plus petites bandes et les bandes de plus en plus grosses et en
associant la ligne dans le gel à la base terminale.
Figure II.34 : Séquençage de l’ADN (Gilles Furelaud 2014)
Il ne reste plus qu'à "lire" la séquence: on fait migrer tous ces fragments sur un gel afin de les
séparer selon leur taille. Au niveau d'une "ligne" du gel correspond une taille (précise au
nucléotide près) du fragment d'ADN. Afin de lire les quatre nucléotides de l'ADN, on fait
migrer séparément les fragments issus des quatre mélanges réactionnels (à ddATP, à ddCTP,
à ddGTP et à ddTTP) (figure 35).