Matériel et méthodes
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Lorsqu’une suspension bactérienne de densité convenable est répartie dans les différentes
alvéoles qui composent la microgalerie (contenant de substrats déshydratés), les métabolites
produits durant la période d’incubation se traduisent par des changements de couleur spontanés
ou révélés par addition de réactifs. Elle comprend 20 tests biochimiques.
Figure 7 : Galerie Api 20E (ephytia.inra.fr/2016).
Mode opératoire
- Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau
distillée ou déminéralisée dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.
- Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte.
- Sortir la galerie de son emballage et placer la galerie dans la boîte d'incubation.
- Préparer la suspension bactérienne en introduisant 2 à 3 colonies par une anse de platine dans
5 ml d’eau distillée puis agiter avec un vortex.
- Introduire la suspension bactérienne dans les tubes de la galerie à l'aide d’une pipette Pasteur
ou d’une micropipette (pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de
la micropipette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers
l'avant) :
- Pour les tests CIT, VP et GEL, remplir tube et cupule,
- Pour les autres tests, remplir uniquement les tubes.
- Pour les tests ADH, LDC, ODC, H2S, URE créer une anaérobiose en remplissant leur cupule
d'huile de paraffine.
- Refermer la boîte et incuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures.
II.4. Étude de la résistance aux antibiotiques par Antibiogramme
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques a été réalisée par la méthode de diffusion
en milieu gélosé (CASFM, 2021).
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Lorsqu’une suspension bactérienne de densité convenable est répartie dans les différentes
alvéoles qui composent la microgalerie (contenant de substrats déshydratés), les métabolites
produits durant la période d’incubation se traduisent par des changements de couleur spontanés
ou révélés par addition de réactifs. Elle comprend 20 tests biochimiques.
Figure 7 : Galerie Api 20E (ephytia.inra.fr/2016).
Mode opératoire
- Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau
distillée ou déminéralisée dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.
- Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte.
- Sortir la galerie de son emballage et placer la galerie dans la boîte d'incubation.
- Préparer la suspension bactérienne en introduisant 2 à 3 colonies par une anse de platine dans
5 ml d’eau distillée puis agiter avec un vortex.
- Introduire la suspension bactérienne dans les tubes de la galerie à l'aide d’une pipette Pasteur
ou d’une micropipette (pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de
la micropipette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers
l'avant) :
- Pour les tests CIT, VP et GEL, remplir tube et cupule,
- Pour les autres tests, remplir uniquement les tubes.
- Pour les tests ADH, LDC, ODC, H2S, URE créer une anaérobiose en remplissant leur cupule
d'huile de paraffine.
- Refermer la boîte et incuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures.
II.4. Étude de la résistance aux antibiotiques par Antibiogramme
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques a été réalisée par la méthode de diffusion
en milieu gélosé (CASFM, 2021).