Matériel et méthodes
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L'antibiogramme a pour but de déterminer la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) d'une
souche bactérienne vis-à-vis de divers antibiotiques qui sont choisis selon la souche testée en
tenant compte des résistances naturelles. Ces antibiotiques sont sous forme de disques de papier
imprégnés avec une concentration déterminée d’agent antimicrobien. Ils sont clairement
identifiés par un sigle, comportant 1 à 3 lettres, imprimé de chaque côté du disque.
Répartir le milieu Mueller Hinton dans des boîtes de Pétri stériles de façon à obtenir une
épaisseur de 4 mm ± 0.5 mm (soit environ 25 ml par boîte de Pétri de 90 mm de diamètre).
La croissance des bactéries dessine des halos d’inhibition au tour du disque d’antibiotique. La
croissance bactérienne s’arrête en présence de la concentration minimale d’inhibition autour du
disque d’antibiotique.
Mode opératoire
-Préparation de l’inoculum
-L’inoculum bactérien est préparé en ensemençant dans 5 ml d’eau physiologique stérile à
raison de 0.9% au moins trois à cinq colonies bien isolées de même type morphologique d'une
culture jeune sur milieu gélosé.
- Prélever à l'aide d'une pipette Pasteur ou de l’anse de platine. Décharger bien l’anse
afin de préparer une solution bactérienne de 0,5 Mc Farland (10
8 cellules /ml).
- L’inoculum bactérien doit idéalement être employé dans les 15minutes qui suivent sa
préparation.
-Ensemencement des boîtes :
Plonger un écouvillon en coton stérile dans la suspension bactérienne et éliminer l’excès de
liquide en tournant l’écouvillon sur les parois du tube.
Ensemencer en stries sur toute la surface de la boite, pour écouvillonner la totalité de la surface
de la gélose, l’opération se répète encore deux fois, en tournant la boîte de 60° à chaque fois
(trois directions) sans oublier de faire pivoter l’écouvillon sur lui- même et de passer
l’écouvillon sur la périphérie de la gélose (pourtour de la gélose).
- Déposer les disques d’antibiotiques à la surface de la gélose inoculée à l’aide d’une
pince stérile selon la figure 8.
- Les disques une fois déposés ne peuvent être déplacés car la diffusion des
antibiotiques est très rapide.
- Laisser les antibiotiques pré-diffuser environs 15mi avant de les incuber à 37°C
pendant 18-24h.
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L'antibiogramme a pour but de déterminer la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) d'une
souche bactérienne vis-à-vis de divers antibiotiques qui sont choisis selon la souche testée en
tenant compte des résistances naturelles. Ces antibiotiques sont sous forme de disques de papier
imprégnés avec une concentration déterminée d’agent antimicrobien. Ils sont clairement
identifiés par un sigle, comportant 1 à 3 lettres, imprimé de chaque côté du disque.
Répartir le milieu Mueller Hinton dans des boîtes de Pétri stériles de façon à obtenir une
épaisseur de 4 mm ± 0.5 mm (soit environ 25 ml par boîte de Pétri de 90 mm de diamètre).
La croissance des bactéries dessine des halos d’inhibition au tour du disque d’antibiotique. La
croissance bactérienne s’arrête en présence de la concentration minimale d’inhibition autour du
disque d’antibiotique.
Mode opératoire
-Préparation de l’inoculum
-L’inoculum bactérien est préparé en ensemençant dans 5 ml d’eau physiologique stérile à
raison de 0.9% au moins trois à cinq colonies bien isolées de même type morphologique d'une
culture jeune sur milieu gélosé.
- Prélever à l'aide d'une pipette Pasteur ou de l’anse de platine. Décharger bien l’anse
afin de préparer une solution bactérienne de 0,5 Mc Farland (10
8 cellules /ml).
- L’inoculum bactérien doit idéalement être employé dans les 15minutes qui suivent sa
préparation.
-Ensemencement des boîtes :
Plonger un écouvillon en coton stérile dans la suspension bactérienne et éliminer l’excès de
liquide en tournant l’écouvillon sur les parois du tube.
Ensemencer en stries sur toute la surface de la boite, pour écouvillonner la totalité de la surface
de la gélose, l’opération se répète encore deux fois, en tournant la boîte de 60° à chaque fois
(trois directions) sans oublier de faire pivoter l’écouvillon sur lui- même et de passer
l’écouvillon sur la périphérie de la gélose (pourtour de la gélose).
- Déposer les disques d’antibiotiques à la surface de la gélose inoculée à l’aide d’une
pince stérile selon la figure 8.
- Les disques une fois déposés ne peuvent être déplacés car la diffusion des
antibiotiques est très rapide.
- Laisser les antibiotiques pré-diffuser environs 15mi avant de les incuber à 37°C
pendant 18-24h.