Matériel et méthodes
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Les bactéries mobiles diffusent à partir de la ligne d’ensemencement, créant un trouble dans le
milieu alors que les bactéries immobiles poussent uniquement le long de la strie
d’ensemencement (Marchal et Bourdon, 1982).
II .2.3.5. Test de résistance à la chaleur
La plupart des entérocoques sont résistants et capables de pousser à des températures allant de
10 à 45°C et peuvent survivent à une température de 60°C pendant 30min.
Pour réaliser ce test nous avons ensemencé de 2 à 3 colonies ayant poussées sur gélose Slanetz
et Bartley dans des tubes qui contiennent 5ml de BHIB puis placées 30 min au bain marie à
60°C. Par la suite, les tubes sont incubés à 37°C pendant 24 à 48 h. Les cultures positives ont
été considérées comme des souches thermorésistantes après la formation de trouble (Stiles et
Holzapfel, 1997 ; Teuber et Geis, 2006).
II .2.3.6. Test de résistance au tellurite de potassium
Enterococcus faecalis se différencie de la plupart des espèces d’entérocoques par la réduction
du tellurite de potassium (J.Grosjean et al. 2017).C’est le test de reconnaissance d’E.faecalis.
Pour réaliser ce test nous avons ensemencé de 2 à 3 colonies ayant poussées sur gélose Slanetz
et Bartley dans des tubes qui contiennent 4,5 ml de BHIB est additionné de 0,5 ml de tellurite
de potassium préalablement dilué au 1/250. Par la suite, les tubes sont incubés à 37°C pendant
24 à 48 h. Les cultures positives ont été considérées comme des souches d’E.faecalis.
II.2.3.7. Test de résistance à la salinité
Une eau peptonée (100ml) additionnée de 6.5g de NaCl est utilisée pour déterminer les souches
d’Entérocoques. Des tubes de bouillon hyper salé sont inoculés en ensemençant 2 à 3 colonies,
puis incubés à 37°C pendant 24 à 48 h. Les cultures positives ont été considérées comme des
souches halotolérantes lorsqu’il y a formation de trouble (Belaid et Hocine, 2017).
II .3. Identification des coliformes par la Galerie API 20E
Les galeries API (Analytical profile index) sont de réalisation facile et de haute performance
(résultat fiable). Elles se présentent sous la forme d’une série de petits tubes, nommés tubules,
correspondant chacun à un test biochimique spécifique. Chaque tubule est ouvert à son
extrémité supérieure par une cupule pouvant être remplie, ou non, de liquide afin de placer le
tube dans des conditions particulières. Chaque tube contient un substrat défini (ONPG, ADH,
GEL...) et avec lequel les micro-organismes réagissent différemment(ephytia.inra.fr/ 2016).
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Les bactéries mobiles diffusent à partir de la ligne d’ensemencement, créant un trouble dans le
milieu alors que les bactéries immobiles poussent uniquement le long de la strie
d’ensemencement (Marchal et Bourdon, 1982).
II .2.3.5. Test de résistance à la chaleur
La plupart des entérocoques sont résistants et capables de pousser à des températures allant de
10 à 45°C et peuvent survivent à une température de 60°C pendant 30min.
Pour réaliser ce test nous avons ensemencé de 2 à 3 colonies ayant poussées sur gélose Slanetz
et Bartley dans des tubes qui contiennent 5ml de BHIB puis placées 30 min au bain marie à
60°C. Par la suite, les tubes sont incubés à 37°C pendant 24 à 48 h. Les cultures positives ont
été considérées comme des souches thermorésistantes après la formation de trouble (Stiles et
Holzapfel, 1997 ; Teuber et Geis, 2006).
II .2.3.6. Test de résistance au tellurite de potassium
Enterococcus faecalis se différencie de la plupart des espèces d’entérocoques par la réduction
du tellurite de potassium (J.Grosjean et al. 2017).C’est le test de reconnaissance d’E.faecalis.
Pour réaliser ce test nous avons ensemencé de 2 à 3 colonies ayant poussées sur gélose Slanetz
et Bartley dans des tubes qui contiennent 4,5 ml de BHIB est additionné de 0,5 ml de tellurite
de potassium préalablement dilué au 1/250. Par la suite, les tubes sont incubés à 37°C pendant
24 à 48 h. Les cultures positives ont été considérées comme des souches d’E.faecalis.
II.2.3.7. Test de résistance à la salinité
Une eau peptonée (100ml) additionnée de 6.5g de NaCl est utilisée pour déterminer les souches
d’Entérocoques. Des tubes de bouillon hyper salé sont inoculés en ensemençant 2 à 3 colonies,
puis incubés à 37°C pendant 24 à 48 h. Les cultures positives ont été considérées comme des
souches halotolérantes lorsqu’il y a formation de trouble (Belaid et Hocine, 2017).
II .3. Identification des coliformes par la Galerie API 20E
Les galeries API (Analytical profile index) sont de réalisation facile et de haute performance
(résultat fiable). Elles se présentent sous la forme d’une série de petits tubes, nommés tubules,
correspondant chacun à un test biochimique spécifique. Chaque tubule est ouvert à son
extrémité supérieure par une cupule pouvant être remplie, ou non, de liquide afin de placer le
tube dans des conditions particulières. Chaque tube contient un substrat défini (ONPG, ADH,
GEL...) et avec lequel les micro-organismes réagissent différemment(ephytia.inra.fr/ 2016).