Matériel et méthodes
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(Grossissement : objectif x 100) en lumière blanche (lumière maximale).
Les bactéries Gram positif se colorent en violet alors que les Gram négatif se colorent en rose.
II.2.3.2. Test de la catalase
L’enzyme catalase a pour effet de catalyser la dismutation du peroxyde d’hydrogène (l’eau
oxygénée) en eau et oxygène, selon la réaction suivante :
2 H2O2 → O2+2 H2O (Vezina et Lacroix, 2000).
Technique :
La technique consiste à prélever une partie de la colonie et de l’émulsionner dans une goutte
d’eau oxygénée. S’il y a dégagement des bulles de gaz ; catalase positive. En absence de bulles
; catalase négatif (Prescott et al, 2003).
II.2.3.3. Test de l’oxydase
Le test de l’oxydase est basé sur une éventuelle production bactérienne d’une enzyme de la
chaine respiratoire : oxydase intracellulaire en présence d’oxygène atmosphérique et de
cytochrome C (Vezina et Lacroix, 2000).
Technique
Placer un disque d’oxydase sur une lame propre et stérile.
Déposer à l’aide d’une pipette Pasteur une goutte de suspension bactérienne pure sur un disque
oxydase", celui-ci contient de l’oxalate de diméthylparaphénylène diamine. Le développement
d’une couleur violette signifie que le test et positif et que l’isolat possède l’enzyme oxydase
(Kovacs et al, 1995).
II .2.3.4. Test Mannitol- mobilité
Le milieu Mannitol Mobilité permet l’étude de la fermentation du mannitol (caractère
biochimique) et la mobilité de la souche (caractère morphologique). Ce milieu est utilisable
uniquement pour les bactéries fermentatives. La présence d’une faible teneur d’agar (gélose
molle) rend possible le déplacement des bactéries mobiles autour de la piqûre centrale (le milieu
est ensemencé à l’aide d’une pipette Pasteur à bout fermée et incubé à 37°C pendant 18-24
heures). La lecture de l’utilisation du mannitol se fait grâce à la présence d’un indicateur de pH,
le rouge de phénol. L’utilisation du mannitol acidifie le milieu qui peut ainsi être révélé par le
virage de l’indicateur de pH à sa teinte acide (jaune).
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(Grossissement : objectif x 100) en lumière blanche (lumière maximale).
Les bactéries Gram positif se colorent en violet alors que les Gram négatif se colorent en rose.
II.2.3.2. Test de la catalase
L’enzyme catalase a pour effet de catalyser la dismutation du peroxyde d’hydrogène (l’eau
oxygénée) en eau et oxygène, selon la réaction suivante :
2 H2O2 → O2+2 H2O (Vezina et Lacroix, 2000).
Technique :
La technique consiste à prélever une partie de la colonie et de l’émulsionner dans une goutte
d’eau oxygénée. S’il y a dégagement des bulles de gaz ; catalase positive. En absence de bulles
; catalase négatif (Prescott et al, 2003).
II.2.3.3. Test de l’oxydase
Le test de l’oxydase est basé sur une éventuelle production bactérienne d’une enzyme de la
chaine respiratoire : oxydase intracellulaire en présence d’oxygène atmosphérique et de
cytochrome C (Vezina et Lacroix, 2000).
Technique
Placer un disque d’oxydase sur une lame propre et stérile.
Déposer à l’aide d’une pipette Pasteur une goutte de suspension bactérienne pure sur un disque
oxydase", celui-ci contient de l’oxalate de diméthylparaphénylène diamine. Le développement
d’une couleur violette signifie que le test et positif et que l’isolat possède l’enzyme oxydase
(Kovacs et al, 1995).
II .2.3.4. Test Mannitol- mobilité
Le milieu Mannitol Mobilité permet l’étude de la fermentation du mannitol (caractère
biochimique) et la mobilité de la souche (caractère morphologique). Ce milieu est utilisable
uniquement pour les bactéries fermentatives. La présence d’une faible teneur d’agar (gélose
molle) rend possible le déplacement des bactéries mobiles autour de la piqûre centrale (le milieu
est ensemencé à l’aide d’une pipette Pasteur à bout fermée et incubé à 37°C pendant 18-24
heures). La lecture de l’utilisation du mannitol se fait grâce à la présence d’un indicateur de pH,
le rouge de phénol. L’utilisation du mannitol acidifie le milieu qui peut ainsi être révélé par le
virage de l’indicateur de pH à sa teinte acide (jaune).