Matériel et méthodes
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Des aliquotes de 0,1 ml de la solution mère et des dilutions ont été étalés à la surface de la
gélose Slanetz et Bartley additionnée de l’un des antibiotiques cités précédemment.
Calcul du taux de résistance
Le taux de bactéries entérocoques résistantes a été déterminé à la fin par le rapport du nombre
de bactéries obtenues sur gélose BEA additionnée d’antibiotique sur le nombre de bactéries
obtenus sur milieu sans antibiotique.
2.3. Techniques d’identification des entérocoques
II.2.3.Techniques d’identification des entérocoques
II .2.3.1. Coloration de Gram
C'est une double coloration qui nous permet de connaître la forme, l'arrangement (mode
d’assemblage), la pureté ainsi que la nature biochimique de la paroi des cellules purifiées. Cette
coloration permet de classer les bactéries selon leur capacité à fixer le cristal violet. Celles qui
possèdent une enveloppe externe sont décolorées lors du lavage à l’éthanol (Gram négatif),
alors que celles qui n’en possèdent pas vont retenir le colorant (Gram positif). La consistance
et la valeur de la coloration de Gram correspond à des différences biochimiques entre la paroi
des bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif (Franz et Holzapfel, 2004).
Technique
-Préparer et fixer un frottis bactérien à la chaleur du bec Bunsen.
-Recouvrir au violet de Gentiane (cristal violet) pendant 1min. Eliminer l'excès par l'eau
courante ;
-Ajouter du Lugol (mordant) et appliquer pendant 1min, jeter l'excès par l'eau courante ;
-Traiter à l'alcool 95° pendant quelques secondes (10-15 secondes), puis rinçage à l’eau ;
-Recolorer à la Fuschine (safranine) pendant 60 à 75 secondes, rinçage à l'eau puis séchage.
Observation
L'observation se fait en ajoutant de l'huile à immersion au plus fort grossissement
Prévalence résistance (%) = (
Nombre de bactéries sur milieu avec antibiotique
Nombre de bactéries sur milieu sans antibiotique
) X 100
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Des aliquotes de 0,1 ml de la solution mère et des dilutions ont été étalés à la surface de la
gélose Slanetz et Bartley additionnée de l’un des antibiotiques cités précédemment.
Calcul du taux de résistance
Le taux de bactéries entérocoques résistantes a été déterminé à la fin par le rapport du nombre
de bactéries obtenues sur gélose BEA additionnée d’antibiotique sur le nombre de bactéries
obtenus sur milieu sans antibiotique.
2.3. Techniques d’identification des entérocoques
II.2.3.Techniques d’identification des entérocoques
II .2.3.1. Coloration de Gram
C'est une double coloration qui nous permet de connaître la forme, l'arrangement (mode
d’assemblage), la pureté ainsi que la nature biochimique de la paroi des cellules purifiées. Cette
coloration permet de classer les bactéries selon leur capacité à fixer le cristal violet. Celles qui
possèdent une enveloppe externe sont décolorées lors du lavage à l’éthanol (Gram négatif),
alors que celles qui n’en possèdent pas vont retenir le colorant (Gram positif). La consistance
et la valeur de la coloration de Gram correspond à des différences biochimiques entre la paroi
des bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif (Franz et Holzapfel, 2004).
Technique
-Préparer et fixer un frottis bactérien à la chaleur du bec Bunsen.
-Recouvrir au violet de Gentiane (cristal violet) pendant 1min. Eliminer l'excès par l'eau
courante ;
-Ajouter du Lugol (mordant) et appliquer pendant 1min, jeter l'excès par l'eau courante ;
-Traiter à l'alcool 95° pendant quelques secondes (10-15 secondes), puis rinçage à l’eau ;
-Recolorer à la Fuschine (safranine) pendant 60 à 75 secondes, rinçage à l'eau puis séchage.
Observation
L'observation se fait en ajoutant de l'huile à immersion au plus fort grossissement
Prévalence résistance (%) = (
Nombre de bactéries sur milieu avec antibiotique
Nombre de bactéries sur milieu sans antibiotique
) X 100