Matériel et méthodes
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II.2.1.4. Dénombrement des Entérocoques dans le sédiment par la méthode du
nombre le plus probable (N.P.P)
La recherche des entérocoques fécaux s’effectue en deux étapes :
Test présomptif
Il s’agit d’ensemencer une série de tubes contenant le milieu de Rothe à partir des échantillons
de sédiment à analyser. Le milieu de Rothe contient de l’azide de sodium qui est considéré
comme agent sélectif pour la recherche des streptocoques (Delarras 2003).
La solution mère est préparée en diluant 1g du sédiment dans un tube contenant 9ml d’eau
distillée stérile,
On a ensemencé 4 séries de 3 tubes contenant bouillon Rothe avec 1ml de la solution mère et
de ces dilutions (10¯² à 10¯⁴) incubé à 37°C pendant 24h.
Test confirmatif
On prend 1ml de chaque tube positif et on l’ensemence dans 5ml de bouillon Litsky ;
l’incubation se fait à 37°C pendant 24H. Les résultats positifs se traduisent par l’apparition d’un
trouble et une pastille violette ou blanche au fond du tube.
Les résultats sont exprimés en nombre d’entérocoques par 1g de sédiment à analyser en se
référant à la table NPP (Delarras, 2003 ; Rodier et al, 2005).
II.2.2. Prévalence de la résistance aux antibiotiques des Entérocoques
2.2.1. Dans l’eau :
L’évaluation des taux de résistance aux antibiotiques des entérocoques a été effectuée par la
filtration de 100ml d’échantillon ou de dilution et l’incubation des membranes sur milieu
Slanetz et Bartley additionné ou non des antibiotiques suivants à une concentration critique : la
vancomycine (10
5 µg/ml), la gentamicine (4.10
4
µg/ml), l’ampicilline (50µg/ml), la tétracycline
(5µg/ml), la ciprofloxacine (80µg/ml) et l’azithromycine (0,01g/ml).
L’incubation du milieu est effectuée à 35±2°C pendant 24-48h pour les entérocoques.
Après 24 heures d’incubation à 35±2°C, les streptocoques fécaux apparaissent sous forme de
petites colonies rouges ou roses, lisses, légèrement bombées. La confirmation de ces colonies
se fait sur gélose BEA pendant 2h. Les entérocoques apparaissent noirs.
2.2.2. Dans le sédiment
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II.2.1.4. Dénombrement des Entérocoques dans le sédiment par la méthode du
nombre le plus probable (N.P.P)
La recherche des entérocoques fécaux s’effectue en deux étapes :
Test présomptif
Il s’agit d’ensemencer une série de tubes contenant le milieu de Rothe à partir des échantillons
de sédiment à analyser. Le milieu de Rothe contient de l’azide de sodium qui est considéré
comme agent sélectif pour la recherche des streptocoques (Delarras 2003).
La solution mère est préparée en diluant 1g du sédiment dans un tube contenant 9ml d’eau
distillée stérile,
On a ensemencé 4 séries de 3 tubes contenant bouillon Rothe avec 1ml de la solution mère et
de ces dilutions (10¯² à 10¯⁴) incubé à 37°C pendant 24h.
Test confirmatif
On prend 1ml de chaque tube positif et on l’ensemence dans 5ml de bouillon Litsky ;
l’incubation se fait à 37°C pendant 24H. Les résultats positifs se traduisent par l’apparition d’un
trouble et une pastille violette ou blanche au fond du tube.
Les résultats sont exprimés en nombre d’entérocoques par 1g de sédiment à analyser en se
référant à la table NPP (Delarras, 2003 ; Rodier et al, 2005).
II.2.2. Prévalence de la résistance aux antibiotiques des Entérocoques
2.2.1. Dans l’eau :
L’évaluation des taux de résistance aux antibiotiques des entérocoques a été effectuée par la
filtration de 100ml d’échantillon ou de dilution et l’incubation des membranes sur milieu
Slanetz et Bartley additionné ou non des antibiotiques suivants à une concentration critique : la
vancomycine (10
5 µg/ml), la gentamicine (4.10
4
µg/ml), l’ampicilline (50µg/ml), la tétracycline
(5µg/ml), la ciprofloxacine (80µg/ml) et l’azithromycine (0,01g/ml).
L’incubation du milieu est effectuée à 35±2°C pendant 24-48h pour les entérocoques.
Après 24 heures d’incubation à 35±2°C, les streptocoques fécaux apparaissent sous forme de
petites colonies rouges ou roses, lisses, légèrement bombées. La confirmation de ces colonies
se fait sur gélose BEA pendant 2h. Les entérocoques apparaissent noirs.
2.2.2. Dans le sédiment