Matériel et méthodes
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Technique
Les solutions mères des échantillons sont préparées par la pesée de 1g de sédiment de chaque
plage, puis dans des conditions stériles on l’ajoute à un tube contenant 9ml d’eau distillée stérile
avec agitation pendant quelques secondes à l'aide d'un vortex.
Préparer3 séries de 3 tubes (BLBVB).
Prélever 1mL de la suspension mère à l'aide d’une micropipette avec cônes stériles et transférer
à chaque fois dans un tube contenant 10 ml de bouillon de culture, mélanger et s’assurer de
l’absence d’air dans la cloche de Durham pour le bouillon lactosé bilié au vert brillant.
La dilution suivante s'effectue en répétant les opérations décrites ci-dessus mais en partant du
tube de la dilution précédente.
La recherche des coliformes fécaux s’effectue en deux étapes :
Test présomptif
Il s’agit d’ensemencer une série de tubes contenant le milieu de BLBVB à partir des échantillons
de sédiment à analyser.
Tous les microorganismes autres que les coliformes sont partiellement ou totalement inhibés
par l'association de la bile et de vert brillant.
L’incubation se fait à 37 °C pendant 48 heures, les tubes présentant un trouble et un dégagement
gazeux (1/3 du volume total de la cloche) sont présomptifs de la présence de coliformes. La
confirmation peut se faire avec un deuxième passage sur ce milieu à 37°C. Le nombre
caractéristique formé lors de la lecture est lue sur une table de NPP et les résultats sont exprimés
par NPP coliforme/g de sédiment.
Dénombrement de coliformes thermotolérants et E.coli
A partir d’un milieu présomptif positif, prélever à l’aide d’une micropipette ou d’une pipette
Pasteur préalablement stérilisée à la flamme et inoculer dans le bouillon Schubert
L’incubation s’effectue pendant 48 heures à 44 °C. Les tubes présentant un trouble accompagné
d’un dégagement gazeux confirment la présence des coliformes fécaux. Les résultats sont
exprimés en nombre de bactéries par 1g de sédiment à analyser en se référant à la table NPP
(Rodier et al. 2005).
Afin de rechercher E. Coli il suffit d’ajouter quelques gouttes de réactif de Kovacs aux tubes
positifs. L’apparition d’un anneau rouge est synonyme de présence d’E.coli.
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Technique
Les solutions mères des échantillons sont préparées par la pesée de 1g de sédiment de chaque
plage, puis dans des conditions stériles on l’ajoute à un tube contenant 9ml d’eau distillée stérile
avec agitation pendant quelques secondes à l'aide d'un vortex.
Préparer3 séries de 3 tubes (BLBVB).
Prélever 1mL de la suspension mère à l'aide d’une micropipette avec cônes stériles et transférer
à chaque fois dans un tube contenant 10 ml de bouillon de culture, mélanger et s’assurer de
l’absence d’air dans la cloche de Durham pour le bouillon lactosé bilié au vert brillant.
La dilution suivante s'effectue en répétant les opérations décrites ci-dessus mais en partant du
tube de la dilution précédente.
La recherche des coliformes fécaux s’effectue en deux étapes :
Test présomptif
Il s’agit d’ensemencer une série de tubes contenant le milieu de BLBVB à partir des échantillons
de sédiment à analyser.
Tous les microorganismes autres que les coliformes sont partiellement ou totalement inhibés
par l'association de la bile et de vert brillant.
L’incubation se fait à 37 °C pendant 48 heures, les tubes présentant un trouble et un dégagement
gazeux (1/3 du volume total de la cloche) sont présomptifs de la présence de coliformes. La
confirmation peut se faire avec un deuxième passage sur ce milieu à 37°C. Le nombre
caractéristique formé lors de la lecture est lue sur une table de NPP et les résultats sont exprimés
par NPP coliforme/g de sédiment.
Dénombrement de coliformes thermotolérants et E.coli
A partir d’un milieu présomptif positif, prélever à l’aide d’une micropipette ou d’une pipette
Pasteur préalablement stérilisée à la flamme et inoculer dans le bouillon Schubert
L’incubation s’effectue pendant 48 heures à 44 °C. Les tubes présentant un trouble accompagné
d’un dégagement gazeux confirment la présence des coliformes fécaux. Les résultats sont
exprimés en nombre de bactéries par 1g de sédiment à analyser en se référant à la table NPP
(Rodier et al. 2005).
Afin de rechercher E. Coli il suffit d’ajouter quelques gouttes de réactif de Kovacs aux tubes
positifs. L’apparition d’un anneau rouge est synonyme de présence d’E.coli.