Matériel et méthodes
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effectuée à 35±2°C pendant 24-48h pour les coliformes totaux, alors que pour les coliformes
thermotolérants, elle est effectuée à 44°C.
II.2.1.2. Dénombrement des Entérocoques dans l’eau par méthode de filtration sur
membrane
La recherche des entérocoques s’effectue en deux étapes, la première est présomptive alors que
la deuxième est confirmative.
Test présomptif
Cette méthode consiste à la filtration de 100 ml de l’échantillon ou de ses dilutions sur une
membrane stérile, de porosité 0,45 μm, placée dans une rampe de filtration dans des conditions
stériles (Rodier et al. 2009). La membrane est déposée à la surface du milieu solide Slanetz et
Bartley et incubée à 37°C pendant 24h. Après 24 heures d’incubation, les streptocoques fécaux
apparaissent sous forme de petites colonies rouges ou roses, lisses, légèrement bombées.
Test confirmatif
Pour la confirmation on prend la même membrane et on la dépose sur le milieu BEA (gélose
Bile Esculine Azide) à 37°C pendant 2h.
Si les colonies deviennent noires : on est en présence d’entérocoques.
II.2.1.3. Recherche des coliformes totaux, fécaux et E.coli dans le sédiment par la méthode
du nombre le plus probable (N.P.P) :
Cette méthode de dénombrement est une estimation statistique du nombre de microorganismes
supposés distribués de manière parfaitement aléatoire (loi de poisson : probabilité d’apparition
aléatoire des évènements « rares »). Dans ce type de méthodes, les bactéries se multiplient
librement dans le milieu liquide (par suite de l’utilisation de milieux sélectifs) et sont présentes
par l’apparition d’un trouble ou virage de couleur du bouillon et dégagement de gaz (Hebbar,
2005).
Les coliformes fécaux sont des bactéries Gram négatives, aérobie et anaérobies facultatifs, en
forme de bâtonnets, ne sporulant pas et fermentant le lactose en produisant du gaz en 24 heures
lors de leur croissance à 44.5°C (APHA et al, 1997). Ils produisent de l’indole en eau peptonée
sans tryptophane en culture à 44.5°C (OMS/PNUE, 1995).
Ce groupe comprend Escherichia coli et, à un degré moindre les genres : Klebsiella oxytoca,
Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundi et C.diversus.
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effectuée à 35±2°C pendant 24-48h pour les coliformes totaux, alors que pour les coliformes
thermotolérants, elle est effectuée à 44°C.
II.2.1.2. Dénombrement des Entérocoques dans l’eau par méthode de filtration sur
membrane
La recherche des entérocoques s’effectue en deux étapes, la première est présomptive alors que
la deuxième est confirmative.
Test présomptif
Cette méthode consiste à la filtration de 100 ml de l’échantillon ou de ses dilutions sur une
membrane stérile, de porosité 0,45 μm, placée dans une rampe de filtration dans des conditions
stériles (Rodier et al. 2009). La membrane est déposée à la surface du milieu solide Slanetz et
Bartley et incubée à 37°C pendant 24h. Après 24 heures d’incubation, les streptocoques fécaux
apparaissent sous forme de petites colonies rouges ou roses, lisses, légèrement bombées.
Test confirmatif
Pour la confirmation on prend la même membrane et on la dépose sur le milieu BEA (gélose
Bile Esculine Azide) à 37°C pendant 2h.
Si les colonies deviennent noires : on est en présence d’entérocoques.
II.2.1.3. Recherche des coliformes totaux, fécaux et E.coli dans le sédiment par la méthode
du nombre le plus probable (N.P.P) :
Cette méthode de dénombrement est une estimation statistique du nombre de microorganismes
supposés distribués de manière parfaitement aléatoire (loi de poisson : probabilité d’apparition
aléatoire des évènements « rares »). Dans ce type de méthodes, les bactéries se multiplient
librement dans le milieu liquide (par suite de l’utilisation de milieux sélectifs) et sont présentes
par l’apparition d’un trouble ou virage de couleur du bouillon et dégagement de gaz (Hebbar,
2005).
Les coliformes fécaux sont des bactéries Gram négatives, aérobie et anaérobies facultatifs, en
forme de bâtonnets, ne sporulant pas et fermentant le lactose en produisant du gaz en 24 heures
lors de leur croissance à 44.5°C (APHA et al, 1997). Ils produisent de l’indole en eau peptonée
sans tryptophane en culture à 44.5°C (OMS/PNUE, 1995).
Ce groupe comprend Escherichia coli et, à un degré moindre les genres : Klebsiella oxytoca,
Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundi et C.diversus.