PROTEINES E TAC/DES AMINES
29
2) METHODOLOGIE DE L'ETUDE D’UN PEPTIDE DE SEQUENCE
INCONNUE
a) Composition en acides aminés
.
Rupture des liaisons peptidiques : hydrolyse totale par l’acide
chlorhydrique concentré et à chaud pendant 24 à 72 heures (dans ce cas
.
le TRP est détruit).
Nota : l’hydrolyse enzymatique est difcile à mettre en place (né—.
cessite' d’utiliser plusieurs E } et surtout difficile à
maîtriser (possibilité de destruction partielle des
molécules d ’E elles—mêmes par autolyse).
.
Séparation du mélange des acides car—aminés : par chromatographie
sur résines échangeuses d’ions ou chromatographie bidirnentionnelle sur pa—
pier.
.
Identication et analyse quantitative : à la sortie de la colonne
de résines la réaction colorée à la ninhydrîne pemet de doser chaque acide
a—aminé (identié de plus d’après l’ordre de sortie).
b) Détermination de la séquence :
.
0
Lorsque le peptide est constitué de plusieurs chaînes il faut les
séparer. En général, les liaisons sont soit covalentes (pont disulfure) soit
électrovalentes (liaisons hydrogène).
Nota :
on
peut rompre les ponts disulfure
—
soit par oxydation par l’acide perfomäique :
T
S
T_
|
SO3H
+
SO3H
3
l.
\
_L
—
soit par réduction par le B—mercaptoéthanol :
T
.
S
T
| ——-——> SH
+
HS
S
_L
“
_L