32
Test de Coagulase :
La coagulase est une enzyme responsable de la coagulation du plasma, permettant de distinguer
Staphylococcus aureus (coagulase positive) des autres staphylocoques. Le protocole consiste à
émulsifier une ou deux colonies noires issues de la gélose Baird Parker dans 5 ml de bouillon
nutritif BHIB, puis à incuber à 37°C pendant 24 heures. Ensuite, 0,1 ml de cette suspension est
mélangé à 0,3 ml de plasma de lapin et incubé à nouveau à 37°C pendant 24 heures. Si un caillot
se forme lors de l'inclinaison douce du tube, cela indique une réaction positive pour la
coagulase.
Calcul du Nombre de Colonies :
Le nombre de colonies sur les boîtes de Pétri est calculé selon la formule suivante :
í µí±µí µí±µ(í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼/í µí²í µí²í µí²í µí² ) = ∑ [í µí°í µí° / (í µí±½í µí±½. í µí¿í µí¿. í µí¿í µí¿. í µí² í µí² )]
(6)
N : Nombre de colonies par ml.
C : Nombre de colonies sur les boîtes sélectionnées.
V : Volume de l'inoculum (0,1 ml).
d : Dilution de la première boîte retenue.
F. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réducteurs
Les Clostridium sulfito-réducteurs sont des bacilles Gram positifs, catalase négative,
strictement anaérobies et capables de sporuler. Ils réduisent le sulfite de sodium en présence de
fer, formant du sulfure qui donne une coloration noire aux colonies (Guiraud & Rosec, 2004).
Le protocole pour leur détection commence par la préparation d'un milieu de culture en ajoutant
du sulfite de sodium et de l'alun de fer à de la gélose VF fondue, puis en homogénéisant. Ensuite,
la suspension des échantillons est traitée thermiquement en les chauffant à 80°C pendant 10
minutes pour éliminer les formes végétatives, suivie d'un refroidissement rapide. Enfin, les
échantillons sont inoculés dans la gélose VF sous une atmosphère anaérobie, homogénéisés et
incubés à 37°C pendant 24 heures pour observer la formation des colonies noires.
Lecture des résultats : Les Clostridium sulfito-réducteurs se manifestent sous forme de
colonies noires. Il est essentiel de procéder à une première lecture après 16 heures d'incubation,
car les colonies peuvent devenir envahissantes, compliquant ainsi l'interprétation. Il convient
de compter les colonies noires dont le diamètre dépasse 0,5 mm, puis de calculer le Nombre le
Plus Probable (NPP) en fonction des tubes positifs.
G. Recherche et dénombrement des Salmonelles
Les Salmonelles sont des bacilles à Gram négatif, mobiles, aéro-anaérobies facultatifs, catalase
positive et oxydase négatif, comprenant environ 2000 sérotypes pathogènes pour l'homme et
les animaux (Huss, 1988). Le processus de détection commence par un enrichissement en
Test de Coagulase :
La coagulase est une enzyme responsable de la coagulation du plasma, permettant de distinguer
Staphylococcus aureus (coagulase positive) des autres staphylocoques. Le protocole consiste à
émulsifier une ou deux colonies noires issues de la gélose Baird Parker dans 5 ml de bouillon
nutritif BHIB, puis à incuber à 37°C pendant 24 heures. Ensuite, 0,1 ml de cette suspension est
mélangé à 0,3 ml de plasma de lapin et incubé à nouveau à 37°C pendant 24 heures. Si un caillot
se forme lors de l'inclinaison douce du tube, cela indique une réaction positive pour la
coagulase.
Calcul du Nombre de Colonies :
Le nombre de colonies sur les boîtes de Pétri est calculé selon la formule suivante :
í µí±µí µí±µ(í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼/í µí²í µí²í µí²í µí² ) = ∑ [í µí°í µí° / (í µí±½í µí±½. í µí¿í µí¿. í µí¿í µí¿. í µí² í µí² )]
(6)
N : Nombre de colonies par ml.
C : Nombre de colonies sur les boîtes sélectionnées.
V : Volume de l'inoculum (0,1 ml).
d : Dilution de la première boîte retenue.
F. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réducteurs
Les Clostridium sulfito-réducteurs sont des bacilles Gram positifs, catalase négative,
strictement anaérobies et capables de sporuler. Ils réduisent le sulfite de sodium en présence de
fer, formant du sulfure qui donne une coloration noire aux colonies (Guiraud & Rosec, 2004).
Le protocole pour leur détection commence par la préparation d'un milieu de culture en ajoutant
du sulfite de sodium et de l'alun de fer à de la gélose VF fondue, puis en homogénéisant. Ensuite,
la suspension des échantillons est traitée thermiquement en les chauffant à 80°C pendant 10
minutes pour éliminer les formes végétatives, suivie d'un refroidissement rapide. Enfin, les
échantillons sont inoculés dans la gélose VF sous une atmosphère anaérobie, homogénéisés et
incubés à 37°C pendant 24 heures pour observer la formation des colonies noires.
Lecture des résultats : Les Clostridium sulfito-réducteurs se manifestent sous forme de
colonies noires. Il est essentiel de procéder à une première lecture après 16 heures d'incubation,
car les colonies peuvent devenir envahissantes, compliquant ainsi l'interprétation. Il convient
de compter les colonies noires dont le diamètre dépasse 0,5 mm, puis de calculer le Nombre le
Plus Probable (NPP) en fonction des tubes positifs.
G. Recherche et dénombrement des Salmonelles
Les Salmonelles sont des bacilles à Gram négatif, mobiles, aéro-anaérobies facultatifs, catalase
positive et oxydase négatif, comprenant environ 2000 sérotypes pathogènes pour l'homme et
les animaux (Huss, 1988). Le processus de détection commence par un enrichissement en