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Test confirmatif :
Pour identifier les bactéries, chaque tube de Rothe positif est transféré dans un tube contenant
le milieu Eva-Litsky. Après avoir mélangé soigneusement le milieu et l'inoculum, l'incubation
se fait à 37°C pendant 24 heures. La lecture est effectuée en considérant qu'un tube est positif
s'il présente un trouble microbien et une pastille blanchâtre ou violette au fond du tube. La
lecture finale est basée sur les indications de la table de Mac Grady, en ne prenant en compte
que les tubes positifs ou négatifs du milieu Eva-Litsky.
D. Recherche et Dénombrement des Staphylococcus aureus
Pour identifier Staphylococcus aureus, le milieu de culture spécifique Baird Parker est utilisé.
Staphylococcus aureus, un coccus Gram positif, facultatif anaérobie, se distingue par sa
capacité à produire la coagulase et à fermenter le glucose (FAO, 1988). Le milieu Baird Parker
est préparé et versé dans des boîtes de Pétri. Les dilutions de l’échantillon (10⁻¹, 10⁻², 10⁻³) sont
ajoutées sur la surface du milieu, étalées avec un écouvillon stérile, puis incubées à 37°C
pendant 24 à 48 heures. Les colonies caractéristiques, noires et rondes avec une zone
d’éclaircissement, permettent de confirmer la présence de Staphylococcus aureus.
E. Tests de Confirmation pour Staphylococcus aureus :
Coloration de Gram :
La coloration de Gram est une méthode permettant d'identifier les bactéries selon leur paroi
cellulaire. Les bactéries Gram positives, ayant une paroi épaisse en peptidoglycane, retiennent
le cristal violet, tandis que les bactéries Gram négatives, avec une paroi riche en lipides, ne le
retiennent pas. Pour effectuer cette coloration, un frottis fin est préparé sur une lame propre,
séché et fixé à la chaleur. Le frottis est ensuite inondé de cristal violet pendant 1 minute, rincé
à l'eau, puis l'iode est ajouté comme mordant et laissé pendant 1 minute avant de rincer. L'agent
décolorant est appliqué pendant 15 secondes, suivi d'un rinçage à l'eau. La contre-coloration est
réalisée avec de la safranine pendant 30 secondes à 1 minute, après quoi la lame est rincée et
séchée. Sous un microscope avec l'objectif x100, les bactéries Gram positives apparaissent en
bleu/violet, tandis que les Gram négatives apparaissent en rose/rouge.
Test de Catalase :
La catalase est une enzyme qui décompose le peroxyde d'hydrogène en eau et en oxygène. Pour
effectuer le test de catalase, prélever une colonie isolée sur le milieu Baird Parker avec une anse
stérile. Ajouter 1 ou 2 gouttes de peroxyde d'hydrogène à 3 % sur une lame de verre, puis ajouter
la colonie aux gouttes. La formation de bulles indique une réaction catalase positive.
Test confirmatif :
Pour identifier les bactéries, chaque tube de Rothe positif est transféré dans un tube contenant
le milieu Eva-Litsky. Après avoir mélangé soigneusement le milieu et l'inoculum, l'incubation
se fait à 37°C pendant 24 heures. La lecture est effectuée en considérant qu'un tube est positif
s'il présente un trouble microbien et une pastille blanchâtre ou violette au fond du tube. La
lecture finale est basée sur les indications de la table de Mac Grady, en ne prenant en compte
que les tubes positifs ou négatifs du milieu Eva-Litsky.
D. Recherche et Dénombrement des Staphylococcus aureus
Pour identifier Staphylococcus aureus, le milieu de culture spécifique Baird Parker est utilisé.
Staphylococcus aureus, un coccus Gram positif, facultatif anaérobie, se distingue par sa
capacité à produire la coagulase et à fermenter le glucose (FAO, 1988). Le milieu Baird Parker
est préparé et versé dans des boîtes de Pétri. Les dilutions de l’échantillon (10⁻¹, 10⁻², 10⁻³) sont
ajoutées sur la surface du milieu, étalées avec un écouvillon stérile, puis incubées à 37°C
pendant 24 à 48 heures. Les colonies caractéristiques, noires et rondes avec une zone
d’éclaircissement, permettent de confirmer la présence de Staphylococcus aureus.
E. Tests de Confirmation pour Staphylococcus aureus :
Coloration de Gram :
La coloration de Gram est une méthode permettant d'identifier les bactéries selon leur paroi
cellulaire. Les bactéries Gram positives, ayant une paroi épaisse en peptidoglycane, retiennent
le cristal violet, tandis que les bactéries Gram négatives, avec une paroi riche en lipides, ne le
retiennent pas. Pour effectuer cette coloration, un frottis fin est préparé sur une lame propre,
séché et fixé à la chaleur. Le frottis est ensuite inondé de cristal violet pendant 1 minute, rincé
à l'eau, puis l'iode est ajouté comme mordant et laissé pendant 1 minute avant de rincer. L'agent
décolorant est appliqué pendant 15 secondes, suivi d'un rinçage à l'eau. La contre-coloration est
réalisée avec de la safranine pendant 30 secondes à 1 minute, après quoi la lame est rincée et
séchée. Sous un microscope avec l'objectif x100, les bactéries Gram positives apparaissent en
bleu/violet, tandis que les Gram négatives apparaissent en rose/rouge.
Test de Catalase :
La catalase est une enzyme qui décompose le peroxyde d'hydrogène en eau et en oxygène. Pour
effectuer le test de catalase, prélever une colonie isolée sur le milieu Baird Parker avec une anse
stérile. Ajouter 1 ou 2 gouttes de peroxyde d'hydrogène à 3 % sur une lame de verre, puis ajouter
la colonie aux gouttes. La formation de bulles indique une réaction catalase positive.