30
B. Recherche d’Escherichia. coli :
À l’aide d’une pipette Pasteur, prélever 1 ml des tubes positifs pour le dénombrement des
coliformes fécaux et les transférer dans des tubes contenant le milieu Schubert, munis d’une
cloche de Durham pour recueillir les gaz produits pendant l’incubation. Expulser le gaz,
mélanger le milieu et l’inoculum, puis incuber à 44°C pendant 24 heures. Un tube sera positif
s’il présente un trouble microbien et la présence de gaz.
Test de Mackenzie :
La présence d’E. coli est confirmée par la formation d’un anneau rouge à la surface après l’ajout
de quelques gouttes de réactif de Kovacs, ce qui indique la formation d’indole à partir du
tryptophane. La lecture finale est réalisée selon les indications de la table de Mac Grady.
• Regrouper les chiffres obtenus par série de 3, en commençant par la plus faible dilution.
• Choisir le groupe avec la plus grande valeur possible, idéalement inférieure à 330 pour
une meilleure répartition des dilutions.
• Lire la valeur correspondante dans la table de Mac Grady.
• Calculer le nombre de germes par gramme de farine de poisson selon la formule :
í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼ = í µí°í µí° / (í µí°í µí°. í µí° í µí° )
(5)
Où :
N : est le nombre de colonies correspondant,
V : est le volume de l’inoculum (1 ml),
F : est le facteur de dilution (F = 1/d, où d est la première dilution présentant 3
tubes positifs).
C. Détection et dénombrement des streptocoques fécaux
La détection et le dénombrement des streptocoques fécaux s'effectuent par la méthode du
Nombre le Plus Probable (NPP) en deux étapes. Le test présomptif utilise le milieu Rothe pour
détecter les streptocoques fécaux, tandis que le test confirmatif valide les résultats en repiquant
les tubes positifs sur le milieu Eva-Litsky.
Test présomptif :
Pour la détection des streptocoques fécaux, préparer une série de tubes contenant le milieu
Rothe, en utilisant trois tubes pour chaque dilution (10⁻¹ à 10⁻³). Aseptiquement, transférer 1 ml
de chaque dilution dans les tubes correspondants, puis bien mélanger le milieu avec l'inoculum.
Incuber les tubes à 37°C pendant 24 à 48 heures. Un tube est considéré comme positif s'il montre
un trouble microbien.
B. Recherche d’Escherichia. coli :
À l’aide d’une pipette Pasteur, prélever 1 ml des tubes positifs pour le dénombrement des
coliformes fécaux et les transférer dans des tubes contenant le milieu Schubert, munis d’une
cloche de Durham pour recueillir les gaz produits pendant l’incubation. Expulser le gaz,
mélanger le milieu et l’inoculum, puis incuber à 44°C pendant 24 heures. Un tube sera positif
s’il présente un trouble microbien et la présence de gaz.
Test de Mackenzie :
La présence d’E. coli est confirmée par la formation d’un anneau rouge à la surface après l’ajout
de quelques gouttes de réactif de Kovacs, ce qui indique la formation d’indole à partir du
tryptophane. La lecture finale est réalisée selon les indications de la table de Mac Grady.
• Regrouper les chiffres obtenus par série de 3, en commençant par la plus faible dilution.
• Choisir le groupe avec la plus grande valeur possible, idéalement inférieure à 330 pour
une meilleure répartition des dilutions.
• Lire la valeur correspondante dans la table de Mac Grady.
• Calculer le nombre de germes par gramme de farine de poisson selon la formule :
í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼í µí±¼ = í µí°í µí° / (í µí°í µí°. í µí° í µí° )
(5)
Où :
N : est le nombre de colonies correspondant,
V : est le volume de l’inoculum (1 ml),
F : est le facteur de dilution (F = 1/d, où d est la première dilution présentant 3
tubes positifs).
C. Détection et dénombrement des streptocoques fécaux
La détection et le dénombrement des streptocoques fécaux s'effectuent par la méthode du
Nombre le Plus Probable (NPP) en deux étapes. Le test présomptif utilise le milieu Rothe pour
détecter les streptocoques fécaux, tandis que le test confirmatif valide les résultats en repiquant
les tubes positifs sur le milieu Eva-Litsky.
Test présomptif :
Pour la détection des streptocoques fécaux, préparer une série de tubes contenant le milieu
Rothe, en utilisant trois tubes pour chaque dilution (10⁻¹ à 10⁻³). Aseptiquement, transférer 1 ml
de chaque dilution dans les tubes correspondants, puis bien mélanger le milieu avec l'inoculum.
Incuber les tubes à 37°C pendant 24 à 48 heures. Un tube est considéré comme positif s'il montre
un trouble microbien.