Matériel et méthodes
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b) Test d’hémolyse
L'étude de la pathogénicité des Entérocoques est liée à la recherche de l'existence de
l'hémolysine, il s’agit de l’enzyme responsable de la lyse des hématies. Les bactéries qui
possèdent l'hémolysine dégradent donc l'hémoglobine (Joffin, N., & Joffin, P. 1999).
Mode opératoire
On ensemence les bactéries sur gélose Columbia contenant 5% de sang frais puis on incube à
37°C pendant 24h. (Guiraud, P., & Rosec, J. P. 2004).
Il existe trois principaux types d'hémolyse observés dans le test de l'hémolyse : (Guiraud &
Rosec, 2004).
•
Hémolyse Alpha : Il s'agit d'une hémolyse partielle où la zone autour des colonies
bactériennes présente une coloration verdâtre. Cela indique une dégradation partielle de
l'hémoglobine.
•
Hémolyse Bêta : Il s'agit d'une hémolyse complète où la zone autour des colonies
bactériennes est transparente. Cela indique une dégradation complète de l'hémoglobine.
•
Hémolyse Gamma : Il n'y a pas d'hémolyse observée. Aucun changement de couleur
ou de transparence n'est visible autour des colonies bactériennes.
c) La recherche de la Gélatinase
La Gélatinase est une enzyme qui hydrolyse le collagène en acides aminés ou en peptides.
(Agrane, L., Akhemoum, Ch., & Akhmoum, N. 2023).
Mode opératoire
 Ensemencer 2 à 3 colonies dans le bouillon BHIB et incuber à 37°C pendant 24h.
 Des boites Müller Hinton + Gélatine (3% P/V) sont préparées.
 Des puits sont creusés dans cette gélose et sont ensuite remplis (50µl) de BHIB déjà
ensemencé.
 L’incubation des boites est réalisée à 37°C pendant 24H.
 Le test positif se traduit par l'apparition d'une zone claire autour des puits, la souche est
Gélatinase positive. (Agrane, L.et al., 2023).