Matériel et méthodes
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II-8- Tests de virulence des entérocoques
a) Formation du biofilm
Mode opératoire
 La détermination quantitative de la formation de biofilm a été réalisée dans une
microplaque de titration à 96 puits. Le test est basé sur la mesure colorimétrique du
cristal violet incorporé par les cellules sessiles (Maldonado et al, 2007).
 Une jeune culture bactérienne de 18 heures est ajustée à une densité optique comprise
entre 0.56 et 0.64 à une longueur d'onde de 540 nm.
 Un volume de 250 µl de cette culture est incubé dans une microplaque pendant 6 heures
à 37°C.
 Après l'incubation, les puits sont lavés avec 25 µl de cristal violet à 1% et laissés en
contact pendant 15 minutes.
 Trois lavages sont ensuite réalisés avec du PBS stérile (200 µl par puits) suivi de 200 µl
d'éthanol.
 Le contenu des puits est transféré dans des tubes stériles contenant 1.2 ml d'alcool.
 Après agitation, la densité optique est mesurée à 540 nm. (Maldonado et al, 2007)
 Les souches bactériennes sont ensuite classées en trois catégories en fonction de leur
densité optique :
DO > 0.5 : Forte production de biofilms
0.1 < DO < 0.5 : Production moyenne de biofilms
DO < 0.1 : Faible production de biofilms
Figure 43 : Le test de Biofilm