Matériel et méthodes
49
II-6- Identification
II-6- 1- L’identification microscopique des entérocoques
a) Coloration de Gram
La coloration de Gram est une technique de coloration microscopique utilisée en microbiologie,
cette méthode permet une classification rapide et précise des bactéries. Elle permet en colorant
l'intérieur des bactéries de les différencier selon leur forme (paires, groupes, chaînes…), et leur
Gram. Grace aux colorants utilisés, on affine la caractérisation du type de bactéries à Gram
positif ou à Gram négatif et leur morphologie en bacilles ou en coques.
Mode opératoire
-Préparation d'un frottis bactérien : sur une lame de microscope stérile, déposez une goutte d'eau
distillée.
-Prélevez 2 à 3 colonies bactériennes avec l’anse de platine stérile.
-Répartissez les colonies sur la lame pour former un frottis.
-Sécher avec une flamme : passez rapidement la lame à travers la flamme du bec Bunsen pour
sécher le frottis.
-Fixer le par la chaleur de la flamme.
-Recouvrir la lame avec du violet de gentiane pendant 1 minute.
-Rincer la lame avec de l'eau distillée pour éliminer l'excès de colorant.
-Recouvrir à nouveau la lame avec le lugol pendant 1 minute pour fixer la coloration.
-Rincer à nouveau la lame avec de l'eau distillée pour éliminer l'excès de lugol.
-Plonger la lame dans de l'alcool pendant 30 secondes pour éliminer le violet des bactéries à
paroi mince.
-Rincer la lame avec de l'eau distillée pour arrêter la décoloration.
-Recolorer les bactéries décolorées en les plongeant dans de la fuchsine pendant 1 minute.
-Rincer la lame avec de l'eau distillée pour éliminer l'excès de fuchsine.
-Sécher délicatement la lame en la tapotant doucement avec du papier absorbant pour éliminer
l'humidité résiduelle.