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- Préparer une solution mère de BSA à 1 % .
- Dissoudre l’échantillon (poudre de carapaces de crevettes) dans un volume déterminé d’eau
distillée .
- Ajouter dans les tubes des volumes graduels de solution de BSA .
- Compléter avec de l’eau distillée jusqu’à volume final constant et bien mélanger .
- Ajouter 1 ml de solution de NAOH .
- Ajouter un volume déterminé du réactif de Biuret .
- Incuber à température ambiante de 30 à 90min .
- Prélever une partie de la solution contenue dans les tubes à essais afin de remplir la cuvette
photospectrométrique aux trois quarts .
- Mesurer l’absorbance à la longueur d’onde de 545 nm.
Lecture :
Les valeurs obtenues permettent de tracer la courbe d’étalonnage des absorbances en fonction des
concentrations en protéines, A= f protéines
Détermination de la teneur en sucres totaux (méthode DUBOIS modifiée.
La teneur en sucres totaux a été déterminée par dosage colorimétrique, les sucres et leurs dérivés
méthylés réagissent avec le phénol et l’acide sulfurique concentré pour donner un produit de
coloration jaune orangé stable pendant plusieurs heures (DUBOIS et aln1956).
Mode opératoire :
- Préparer une série de tubes énumérés ;
- Dissoudre l’échantillon de poudre de carapaces de crevettes dans de l’eau distillée.
- Ajouter des volumes graduels de solution de saccharose ;
- Compléter avec de l’eau distillée jusqu’à l’obtention d’un volume final constant ;
- Ajouter une solution de phénol à 80 % ;
- Ajouter de l’acide sulfurique à 95% massique ;