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détermination de la souche la plus probable. Toutes les souches identifiées ont été
conservés par ensemencement sur des tubes de conserve.
II.4 Evaluation de l’interaction des bactéries avec des métaux
La réactivité des bactéries aux métaux lourds a été évaluée par estimation de leur
croissance à partir des tests d’absorbance optique. Ces tests ont été menés sur la culture
des différentes souches bactériennes obtenues après leur isolement et leur purification.
Les valeurs variables de la densité optique obtenues ont été considérées comme des
réponses biologiques des souches bactériennes à l’exposition aux différentes
concentrations des métaux.
II.4.1 Préparation du milieu de culture avec des concentrations variables des
métaux
Le Milieu employé lors de cette étude est le milieu liquide Mueller Hinton MH (annexe
1), ce milieu est destiné pour les bactéries autres que celles à croissance lente tel que les
Entérobactéries et Pseudomonas (CASFM / EUCAST, 2021).
Trois métaux différents en état de sel ont été sélectionnés : le Chlorure de cadmium
(CdCl2.2.5H2O), le nitrate de cobalt(II) Co(NO3)2·6H2Oet le Sulfate de cuivre
(CuSO45H2O). Pour la préparation de cinq concentrations variables (100 µg/ml ; 400
µg/ml et 1000 µg/ml ; 1600 µg/ml ; 3200 µg/ml ) ; différentes masses ont été pesé pour
avoir les concentrations voulus . Une série de 6 tubes à essai a été stérilisée à 121 C°
pendant 15 minute. Un volume de 10 ml des solutions préparées a été versé dans chaque
tube à essai de la série.
La réactivité des souches identifiées et isolées a été donc testée avec trois, à savoir le
cuivre le cobalt et le cadmium. Ces métaux ont été identifiés parmi les polluants présents
avec des concentrations plus ou moins élevées dans les effluents industriels et les oueds
de la zone d’étude. Le cuivre et le cobalt sont des éléments de traces qui sont essentiels
pour de nombreux organismes mais peuvent être toxiques à des concentrations élevées.
En revanche le cadmium est un métal qui est non essentiel et hautement toxique. Le
choix des métaux testés a été également selon la disponibilité des sels métalliques au
laboratoire ainsi que leur facilité d’être solubilisés dans les bouillons nutritifs.
II.4.2 Préparation de l’inoculum bactérien
Des tubes à essai contenants 10 ml du milieu MH stérile ont été inoculés par quelques
colonies bactériennes pour chaque espèce isolée et conservé précédemment, puis
incubés à 30°C pendant 18h pour les réactiver et avoir des souches bactériennes jeunes.
Dans cette partie de l'étude, six souches bactériennes conservées ont été utilisées pour
l’étude de la sensibilité aux éléments traces métalliques (ETM). Ces souches, identifiées
détermination de la souche la plus probable. Toutes les souches identifiées ont été
conservés par ensemencement sur des tubes de conserve.
II.4 Evaluation de l’interaction des bactéries avec des métaux
La réactivité des bactéries aux métaux lourds a été évaluée par estimation de leur
croissance à partir des tests d’absorbance optique. Ces tests ont été menés sur la culture
des différentes souches bactériennes obtenues après leur isolement et leur purification.
Les valeurs variables de la densité optique obtenues ont été considérées comme des
réponses biologiques des souches bactériennes à l’exposition aux différentes
concentrations des métaux.
II.4.1 Préparation du milieu de culture avec des concentrations variables des
métaux
Le Milieu employé lors de cette étude est le milieu liquide Mueller Hinton MH (annexe
1), ce milieu est destiné pour les bactéries autres que celles à croissance lente tel que les
Entérobactéries et Pseudomonas (CASFM / EUCAST, 2021).
Trois métaux différents en état de sel ont été sélectionnés : le Chlorure de cadmium
(CdCl2.2.5H2O), le nitrate de cobalt(II) Co(NO3)2·6H2Oet le Sulfate de cuivre
(CuSO45H2O). Pour la préparation de cinq concentrations variables (100 µg/ml ; 400
µg/ml et 1000 µg/ml ; 1600 µg/ml ; 3200 µg/ml ) ; différentes masses ont été pesé pour
avoir les concentrations voulus . Une série de 6 tubes à essai a été stérilisée à 121 C°
pendant 15 minute. Un volume de 10 ml des solutions préparées a été versé dans chaque
tube à essai de la série.
La réactivité des souches identifiées et isolées a été donc testée avec trois, à savoir le
cuivre le cobalt et le cadmium. Ces métaux ont été identifiés parmi les polluants présents
avec des concentrations plus ou moins élevées dans les effluents industriels et les oueds
de la zone d’étude. Le cuivre et le cobalt sont des éléments de traces qui sont essentiels
pour de nombreux organismes mais peuvent être toxiques à des concentrations élevées.
En revanche le cadmium est un métal qui est non essentiel et hautement toxique. Le
choix des métaux testés a été également selon la disponibilité des sels métalliques au
laboratoire ainsi que leur facilité d’être solubilisés dans les bouillons nutritifs.
II.4.2 Préparation de l’inoculum bactérien
Des tubes à essai contenants 10 ml du milieu MH stérile ont été inoculés par quelques
colonies bactériennes pour chaque espèce isolée et conservé précédemment, puis
incubés à 30°C pendant 18h pour les réactiver et avoir des souches bactériennes jeunes.
Dans cette partie de l'étude, six souches bactériennes conservées ont été utilisées pour
l’étude de la sensibilité aux éléments traces métalliques (ETM). Ces souches, identifiées